浙贝母肌动蛋白基因的克隆及生物信息学分析.pdf

2017年 1月 中成 药 January2017 第39卷 第 1期 ChineseTraditionalPatentMedicine Vol_39 No．1 浙贝母肌动蛋白基因的克隆及生物信息学分析 冯亚斌 ， 施鑫磊 ， 俞信光 ， 沈晓霞 ， 江建铭 ， 王忠华h (1．浙江万里学院生物技术研究所，浙江 宁波 315100；2．浙江省中药研究所，浙江 杭州310023) 摘要：目的 克隆浙贝母FritillariathunbergiiMiq．肌动蛋白 (Actin)基因，并进行生物信息学分析。方法 提取浙 贝母根、茎、叶、花、鳞茎总 RNA，设计合成简并引物。以叶片总RNA为模板 ，通过 RT．PCR和Ta克隆技术克隆 Actin基因保守区序列片段。以该基因为内参基因，对 3一羟基一3一甲基戊二酰辅酶 A还原酶 (HMGR)基因进行组织特 异性表达分析。结果 经 RT—PCR扩增和Ta克隆，得到 1段基因序列 (463bp)。浙贝母Actin基因与岷江百合、郁金 香、虎眼万年青、铁皮石斛、柿子、光皮桦、玉米相似度较高 (84％ ～98％)，其氨基酸序列与阿帝露茅膏菜 、甘蓝 型油菜 、香草兰、岷江百合、麻疯树 、枸杞、红海榄的同源性均在 89％以上，并且其Actin蛋 白与百脉根、岷江百 合 、郁金香亲缘关系较近。HMGR基因在该植物各部位表达有显著差异 ，依次为鳞茎 花叶茎根。结论 首次 从浙贝母中克隆出Actin基因 (命名为FtActin)，可为其有效利用奠定基础。 关键词：浙贝母 ；肌动蛋白 (Actin)基因；克隆；生物信息学分析 中图分类号：R282 文献标志码：A 文章编号：1001—1528(2017)01-0126-05 doi：10．3969／j．issn．1001—1528．2017．O1．025 CloningandbioinformaticsanalysisofActin geneinFritillariathunbergii FENG Ya—bin ， SHIXin—lei， YUXin．guang， SHENXiao—xia ， JIANGJian．ming， W ANG Zhong．hua (J．InstituteofBiotechnology，ZhejiangWaaliUniversity，Ningbo315100，China；2．ZhejiangProvincialInstituteofChineseMeteriaMedica，Hangzhou 310023，China) ABSTRACT：AIM ToclonetheActingeneinFritillariathunbergiiMiq．andtomakebioinkrmaticsanalysis． METHODS ThetotalmRNA inroots，stems，leaves，flowersandbulbsofF．thunbergiiwasextracted，andthe degenerateprimerwasdesignedandsynthesized．W ithtotalmRNA inleavesasatemplate，theconservedfragments ofActingenewasclonedbyRT—PCR andTacloningtechnology．Usingthisgeneasareferencegene，tissuespeci· ficityexpressionanalysiswasadoptedin3一hydroxy一3m·ethylglutaryl—CoAreductase (HMGR)gene．RESULTS Onegenesequence (463bp)wasobtainedbyRT—PCRamplificationandTacloning．TheActingeneinF．thun— bergiishowedhighsimilaritiestothoseinLiliumregaleWilson，Tulipagesneriana，Ornithogalum caudatum Jacq．， DendrobiumofficinaleKimuraetMigo，DiospyroskakiThunb．，BetulaluminiferaH．Wink1．andZeama