甘蔗独脚金内酯生物合成关键基因ScD27的克隆与表达分析.pdf

作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2017，43(1)：31-41 http：／／zwxb．chinacrops．org／ ISSN 0496—3490；CODEN TSHPA9 E—mail：xbzw@chinajourna1．net．cn DoI：10．3724／SP．J．1006．2017．00031 甘蔗独脚金内酯生物合成关键基因SCD27的克隆与表达分析 吴转娣 刘新龙 刘家勇 昝逢刚 李旭娟 刘洪博 林秀琴 陈学宽 苏火生 赵培方 吴才文 云南省农业科学院甘蔗研究所 ／云南省甘蔗遗传改良重点实验室，云南开远 661699 摘 要：独脚金内fl~(strigolactones，SLs)是一类新型植物激素，D27基因是独脚金内酯生物合成途径中最上游的调控 基因，且该基因调控 SLs的合成是一个可逆的过程 。本研究根据水稻 、玉米 、高粱 、二穗短柄草 4种禾本科作物的 D27基因核苷酸序列保守区域设计引物，以甘蔗品种 ROC22的eDNA为模板，利用 RT-PCR和 RACE技术，从甘蔗 中克隆出D27基因的eDNA全长序列，命名为 ScD27，GenBank登录号为KP987221．1。该基因序列全长 1379bp，包 含一个 867bp的完整开放 阅读框 (ORF)，编码 288个氨基酸残基。ScD27编码 的蛋白质分子量为 71．58kD，理论等电 点为 5．O4，是一种非分泌性蛋白，主要分布于叶绿体上，该蛋白的保守区可能具有 2个锌指蛋 白结构域(ZnFTAZ和 — ZnFA20)，且不存在信号肽；该基因编码的氨基酸序列具有较高的保守性，与高粱、谷子 、大麦、短穗二柄草等禾本 科植物的D27氨基酸序列相似性在70％以上；ScD27基因在甘蔗各组织部位均有表达，其中茎尖和腋芽中表达量较高， 叶、茎和根中的表达较低。此外，ScD27基 因在甘蔗茎尖 中的表达受 PEG、盐胁迫、磷缺乏和营养缺乏的诱导，推测 ScD27基因是甘蔗独脚金内酯生物合成途径 中响应非生物胁迫的关键基因。 关键词：甘蔗；ScD27；同源克隆；生物信息学；q-PCR Cloning and Expression Analysis of Key Gene SCD27 in Strigolactones BiosynthesisPathway wUZhuan—D ，LIUXin．Long ，LIUJia—Yong，ZANFeng—Gang，LIXu—Juan，LIUHong—Bo，LINXiu—Qin， CHEN Xue—Kuan，SU Huo—Sheng，ZHA0 Pei—Fang，andW U Cai—Wen。 SugarcaneReserach Institute，YunnanAcademy ofAgriculturalSciences／YunnanKeyLaboratoryofSugarcaneGeneticImprovement，Kaiyuan 661699，China Abstract：Strigolactones(SLs)isanovelclassofplanthormones．D27regulatingreversiblemetabolicprocessislocatedin up．stream ofstrigolactonesbiosynthesispathway．Inthisstudy,primersweredesignedbasedontheconserveddomainsfrom four speciesinludingOryzasativa，Zeamays，Sorghum bicolor，andBrachypodium distachyon．UsingeDNA from sugarcanecultivar ROC22asthetemplate．theful1．1engtheDNA sequenceofD27generfom sugarcanew