《现代分子生物学》第四章3.pptVIP

第八节 真核生物的复制过程 概况 DNA聚合酶 SV40 DNA复制 酵母复制 真核生物复制时的核小体结构 真核生物染色体末端的复制与端粒酶 一、概况： 在真核生物细胞的细胞周期中，DNA的复制发生在中期的S期。 细胞周期 Replication complexes during the cell cycle 真核生物染色体中DNA的复制是通过许多独立的复制子来完成的，其中只有一部分复制子在S期的任何时间都参与复制，而其他复制子只在S期的特定时间活化。 每个复制都有固定的复制起点，常常采取双向复制方式。 与原核生物不同，真核生物的复制子相对较小，而且它们的复制叉移动速度比原核生物复制叉的移动要慢许多。 原核生物的基因组只有一个复制子，而真核生物的染色体含有许多复制起点，是多复制子（multireplicon）。 在一个细胞周期中，染色体上所有的复制子都起始复制，尽管它们不是同时活化的，但都是在一个周期内被激活的，而且每个复制子在一个细胞周期只能被激活一次。 有证据证明，真核生物染色体的复制子中没有复制终止，复制叉从其起点连续移动直到遇到邻近复制子的复制叉时终止复制。 染色体DNA的复制需要三个系统参与(人CS) 二、DNA聚合酶： 与真核细胞中多起点复制相应的特点是细胞中DNA聚合酶的数目众多。一个典型的动物细胞中含有20,000—60,000分子的聚合酶α。 在哺乳动物细胞抽提物中发现了五种不同的DNA聚合酶，它们是α、β、ε、δ、γ。其中α、β、ε、δ位于细胞核中，而γ是线粒体酶。 目前认为，DNA聚合酶α的功能是起始复制，而DNA聚合酶δ的功能是延伸两条链。因此，前导链和滞后链合成的起始具有相同的程序，但还不清楚前导链和滞后链合成的起始是否由同一个DNA聚合酶α引发酶复合物完成的。 DNA聚合酶β的作用是碱基切除修复，而DNA聚合酶γ是线粒体DNA的复制酶。 最近研究发现，DNA聚合酶ε催化亚基的表达与人细胞增殖紧密联系，表明在细胞DNA复制中起关键作用。此外，DNA聚合酶ε也可能参与修复反应。 DNA聚合酶δ的进行性由PCNA滑动钳蛋白来保持。PCNA的晶体结构与大肠杆菌β亚基十分类似，PCNA三聚体形成环围绕着DNA。PCNA的功能与β二聚体是相同的。 原核和真核生物复制体系的比较 E.coli λ SV40/人 酵母 功能 DnaA O T抗原 ORC 起始蛋白 DnaB DnaB T抗原 MCM 解旋酶 DnaC P ? Cdc6 装配因子 DnaG DnaG Polα-引发酶 Polα-引发酶 引发酶 PolⅢ的 α亚基 Polδ Polδ,Polε 聚合酶 PolⅢ的ε亚基 Polδ Polδ,Polε 校正 PolⅢ的?亚基 PCNA PCNA 滑动钳 ? 复合体 RF-C RF-C 滑动钳装配器 SSB RF-A RF-A 单链结合蛋白 三、SV40的DNA复制： SV40（simian virus 40）基因组由5243nt组成，与宿主组蛋白形成小染色体，与染色质结构类似。 SV40病毒只编码一个蛋白质（T抗原）以供基因组复制的需要，其他复制所需要的蛋白质由宿主细胞提供。 SV 40 DNA的复制发生在宿主细胞核中、在病毒和细胞DNA复制之间有很多相似之处，这使SV40病毒成为研究真核生物细胞DNA复制的理想模型体系。 （一）DNA复制起点 在SV40复制起点处有两个T抗原结合位点，其中核心起点是基因组中一个64bp的片段，它含有在体内和体外起始病毒DNA复制所需的所有核苷酸序列元件。 核心起点中心是27bp的严格的反向重复序列，其中含有4个拷贝的五核苷酸序列特征微区（GAGGC），这些序列是病毒起始蛋白T抗原的识别位点。 在T抗原结合位点的一侧是一个由A/T组