细胞培养20134.pptx

组织培养和组化技术细胞形态学实验中心;组 织 培 养 ;细胞培养：将活细胞（尤其是分散的细胞）在体 外培养的方法。 组织培养：从生物体内取出活的组织块，大小在（O.5 ～1立方毫米）或薄片（厚0.2 毫米）在体外进行培养的方法。 器官培养：使用器官原基或器官的一部分或整个器官 (一般指胚胎器官)在体外进行培养的方法。;细胞培养的基本概念;原代培养期: 从体内取出组织细胞开始培养到第一次进行传代之前的这一段时期。 传 代 期: 一旦原代培养经过分割,重新接种到两个或两个以上的器皿内进行培养标志进入传代培养期。 衰 退 期: 传代培养到一定代数时,细胞生命活动明显减弱, 生长缓慢,很少或不再分裂,给更多的营养也无济于事,表明培养物进入衰退期。 ; 细胞系 cell line：是指原代培养物经传代培养后得到的一群 　　　　　　　　　 不均一的细胞,可以长期连续传代。 细胞株cell strain：通过选择或克隆化培养,从原代培养物或 　　　　　　　　　　　 细胞系中获得的具有特殊遗传、生化 　　　　　　　　　　　 性质或特异标志的细胞群。;正常细胞、永生细胞和肿瘤细胞的性状区别;培养细胞的生长方式;培养细胞的形态;;相差显微镜观察培养细胞;悬浮的脂肪细胞;细胞核的荧光染色;细胞骨架的荧光染色;培养细胞双荧光染色;原代细胞培养;原代细胞培养;机械解离细胞法;制成细胞悬液;培养细胞贴壁过程; 每代贴附生长细胞的生长过程;游离期： 细胞接种后在培养液中呈悬浮 状态也称悬浮期。 此时细胞质回缩，胞体呈圆球 形。10分钟～ 4小时 ;贴壁期： 细胞附着于底物上，游离期 结束。 细胞株平均在10分钟～ 4小时贴壁。 底物：胶原、玻璃、塑料、其它细胞等。 ;潜伏期 此时细胞有生长活动，而无细胞分裂。 原代细胞持续约24-96h； 肿瘤细胞或永生细胞约6-24h;对数生长期： 细胞数随时间变化成倍增长， 活力最佳，最适合进行实验研究。 ;停止期（平台期）： 细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂。 机制：接触抑制、密度依赖性、营养液成份。 ;细胞培养设施和基本条件 ; 常用仪器设备和耗材;无 菌 室;无菌室使用规则;无　菌　操　作;超 净 台; CO2培养箱设定的条件： 37 ℃ 5％CO2 作用：维持培养液的 PH值 7.2~7.4范围 NaHCO3+H2O Na+ + OH - + H2O + CO2↑;CO2培养箱使用时注意的问题;倒置光显微镜;显微镜各部分名称;目镜;相差标识;相差显微镜;高压蒸汽灭菌器; 湿热消毒：适用于培养用液、橡胶制品、布类、玻璃 制品和金属器械。;;干热灭菌器; 液氮罐;内部结构;滤 器;正压式滤器;负压式滤器;电 子 天 平;  使用前的准备工作 ;首先检查电源是否连接好。称重时轻拿轻放，被称物品小心加减，不允许散在天平内。将开关打开后，当屏幕上出现0.0000时，才可将被 称物品放上，关好拉门，当屏幕左上角的“0”消失时，即为本品的重量。称重完后将物品取出，关好拉门，关闭开关，搞好清洁卫生，方可离开。; ;去离子水;过滤层去处粗杂质 去有机层 去离子层 去热源层 过滤除菌层;培 养 板;培 养 瓶;细胞的营养需要　　 水、无机盐、葡萄糖、维生素、氨基酸 细胞的生存环境　　 温度（37 ℃）、 O2、pH: 7.2~7.4 、渗透压 无污染 、无毒 ;培养操作基本要领和要求;常用玻璃器皿清洗 　浸泡（自来水）、刷洗（洗衣粉，洗洁精）、 流水冲洗、 干燥、泡酸（24小时）、流水冲洗、 蒸溜水浸泡和冲洗、50℃烘干、包装、灭菌。;清洁液的配制;;Hanks液的配方（ g/L);D-Hanks液的配方（g/L）;PBS的配方;二.消化液;胰蛋白酶： 　　胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使细胞分离。 　　胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无Ca2+、Mg2+的BSS缓冲液配制常