生化分析仪基本参数的原理.doc

了解生化分析仪基本参数的原理，有利于仪器、试剂的正确使用，有助于正确分析和处理测定数据。但是，配套系统的原装分析参数不宜更改；采用非仪器配套的试剂及校准品体系时，参数修改要慎重，对于不同仪器、不同类型的反应分析程序，所显示的人机对话分析参数 信息有所不同。 一、反应监测时间 对于终点法来说，读取反应达到平衡时的吸光度计算样品中待测物的浓度。对于连续监测法来说，要注意观察反应进程曲线，从而确定反应的预孵育期，延迟时间、连续监测的时段。对于一级或伪一级反应来说，连续监测的时间是一级反应的动态期的吸光度；对于基于零级 反应的酶催化活性浓度速率法测定，连续监测的是零级线性反应期的吸光度。对于连续监测法来说，动态反应期的时间越长，越适用于临床应用，对于以酶为工具的代谢物酶促动力测定法，要增加动态反应期，即延长反应达到平衡的时间，可在反应体系中加入竞争性抑制剂 ，这样还可以提高测定的线性范围，对于酶催化活性浓度连续监测法来说，一定要注意线性反应时间，有的酶，例如，以硫代丁酰胆碱为底物的血清假性胆碱酯酶速率测定法，线性反应时间只有90秒。对于连续监测法来说，在监测期至少应读4个点(3个△A)。 多数全自动生化分析仪可以在整个测定反应周期连续监测(如HITACHI 7170常规测定周期10分钟、监测34点，OLYMPUS AU 600固定周期8分15秒、监测27点)，但反应监测时间是指该时间内的测定读数要用于结果计算。它的设置与加样点、加试剂点( 包括R1、R2……)、监测时间(读数点)、读数间隔时间及试剂样品比例等有关，要结合方法学，兼顾权衡。 1．反应时间(Reaction Time) 指仪器的一个分析周期中，试剂和样品混合最末一点测定读数时间。它对终点法尤其重要，是终点法的瓶颈。有的仪器多个反应时间可选 L如Hl—TACHI 7170)，须预先选定。多数仪器10分钟左右，这对试剂提出了较高要求。不少终点法试剂(尤其手工法试剂)反应时间常常也在l O分钟上下，测定时间没有余地，当样品浓度高或试剂质量下降时，均可致测定结果偏低。因此，终点法不宜采用标明反应时间接近和长于仪器最大反应时间的试剂盒。否则，必须用接近测定范围上限的高浓度质控血清监测。 2．监测时间(读数点)和读数间隔时间各类型仪器不尽一致。离心式生化仪读数间隔时间短，监测时间也短。流动式生化仪读数间隔时间一般较长。分立式生化仪一般监测时间10分钟左右，间隔10-30秒读数一次。有的仪器在整个测定反应周期全程读数，有的只读 取指定时间(点)的吸光度。 3．加试剂点采用双试剂时，加R2点决定R1与样品的反应时间，也决定R2与R1及样品的反应时间。一般仪器各5分钟左右。HI TACHI 7170有4个加试剂点，若采用双试剂，各5分钟，则加R2设在第3加试剂点。 4．反应监测时间还要考虑延迟时间的长短、测定物质的浓度范围及相关临床价值和工作效率等因素。 二、延迟时间 延迟时间(Delay Time)指试剂与样品混合后到监测开始之间的时间。一般用于两点法和速率法，某些情况下也用于终点法。终点法应选择反应趋于平 衡的时间(稳定期或平衡期)作测定，测定点前即所谓的孵育期。速率法的线性反应期之前即延迟期。正确选择延迟时间的长短，有利于准确测定，减少试验误差。设置一般根据试剂盒的说明书，还应考虑本室的仪器特点和工作程序。 1．仪器特点 比如，半自动生化仪多为流动比色池，要考虑泵速、进样管长短、反应液黏稠度及混合情况，以及室温、反应液温度同反应要求温度间的温差等。全自动生化仪的测定读数设置方式不同，直接以“秒”设置，或以测定点设置、测定点间隔时间不一样，需要灵活掌握。 2．试剂及方法学 (1)试剂组成在酶活性的连续监测法时，若试剂含工具酶数量多、偶联反应多，则激活反应时间一般较长，延迟时间也较长，如肌酸激酶(NAC法)延迟时间常设置120-180秒；若试剂中底物经待测酶催化，其产物可以直接测定的，则延迟时间较短，如 -谷氨酰转移酶(GGT)设定30-60秒。同一项目同一方法，但试剂配方不同，其反应快慢等特征也可能不同，如白蛋白测定。白蛋白与溴甲酚绿(BCG)为即时反应，10秒钟内已完成，其后球蛋白等也将与BCG发生反应，所以孵育时间不能延长。但在同一测 定时间，BcG浓度、缓冲液种类、pH和表面活性剂不J司的试剂，测定结果可能差异明显。 (2)样品异常成分干扰有的试验项目需要用工具酶将内源性代谢产物耗尽，比如丙氨酸氨基转移酶活性测定试剂中须有足量的乳酸脱氢酶(LDH)。如果使用单试剂，正常血清样品延迟时间60秒即可；但当内源性酮酸增多(如酮症酸中毒)时，试剂内LDH常常不能 在60秒内完全将其清除，剩余酮酸会进入监测期干扰测定，使测定结果偏高，所以延迟时间应