经MHCⅡ通路的屋尘螨1类变应原T细胞表位融合肽疫苗载体.PDF

·174 · doi 10.3969/j.issn. 1673-4254.2015.02.04 J South Med Univ, 2015, 35(2): 174-178 基础研究 经经MHMHCC ⅡⅡ通路的屋尘螨通路的屋尘螨11 类变应原类变应原TT 细胞表位融合肽疫苗载体细胞表位融合肽疫苗载体 的构建的构建与表达与表达 1 2 1 1 3 1 赵蓓蓓 ，姜玉新 ，刁吉东 ，李 娜 ，陆 维 ，李朝品 1 2 3 皖南医学院 医学寄生虫学教研室，生理学教研室，弋矶山医院呼吸内科，安徽 芜湖 241002 摘要：目的构建经MHC Ⅱ通路的屋尘螨1类变应原Der p 1 的T 细胞表位肽疫苗重组载体。方法 分别合成TAT、IhC 和含编码 Der p 1 的3 段T 细胞表位的融合核苷酸序列，用特异性引物PCR 扩增相应的基因片段，分别用相应的双酶切后，用T4 DNA 连 接酶连接形成TAT-IhC-Der p 1-3T 融合基因，并插入至原核表达载体pET-28a(+ ) 中，构建重组原核表达载体pET-28a (+)-TAT-IhC-Der p 1-3T，Bam H Ⅰ和Xho Ⅰ进行双酶切和测序鉴定。重组载体转化大肠杆菌E. coli BL21（DE3）菌株，IPTG诱导 后，经SDS电泳分析和Western blot 验证，纯化TAT-IhC-Der p 1-3T 蛋白后进行IgE结合试验。结果 双酶切和测序结果表 明，成功构建了pET-28a-TAT-IhC-Der p 1-3T 重组原核表达载体；SDS电泳分析显示TAT-IhC-Der p 1-3T 可诱导表达； Western blot 检测表明该融合蛋白纯化成功；IgE 结合试验表明TAT-IhC-Der p 1-3T 结合屋尘螨过敏病人血清IgE 的能力强于 Der p 1变应原（P0.001）。结论 成功构建了可表达经MHC 通路的编码Der p 1 的3段T 细胞表位的重组pET-28a-TAT-IhC-Der p 1-3T载体，纯化的TAT-IhC-Der p 1-3T具有较强的IgE 结合能力，从而为后续经MHC 通路的特异性免疫治疗奠定基础。 关键词：屋尘螨；融合肽疫苗；1类变应原；原核表达；T 细胞表位；IgE 结合试验 Construction of a vector encoding T-cell epitopes of Dermatophagoides pteronyssinus major allergen group 1 as a vaccine delivered by MHC class II pathway 1 2 1 1 3 1 ZHAO Beibei , JIANG Yuxin , DIAO Jidong , LI Na , LU Wei , LI Chaopin 1 2 3 Department of Medical Parasitology , Department of Physiology , Department of Respiratory Medicine, Yijishan Hospital , Wannan Medical College, Wuhu 241002, China Abstract: Objective To construct a vector encoding T-cell epitopes of major allergen group 1 of Dermatophagoides pteronyssinus as a vaccine delivered by MHC class II pathway. Methods