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蛋白质分子的特殊运动——折叠 分子生物学中心法则 蛋白质折叠问题又被称为第二遗传密码 蛋白质折叠研究的理论意义 几乎所有的生命活动都是由蛋白质完成的而蛋白质链只有折叠成天然结构才有活性 生命从蛋白质折叠开始！ 蛋白质折叠研究的应用意义 蛋白质工程的医药保健产品市场每年数十亿美元 已知二十多种疾病与蛋白质的错误折叠有关 （老年痴呆症、疯牛病等） 蛋白质折叠还是蛋白质组研究的瓶颈之一 Amyloidosis淀粉样变性病 有关蛋白质折叠的几项重要研究 1930s 吴宪 变性条件 1.　温度 2.　pH 3.　盐 4.　变性剂 变性原理 破坏次级键 不破坏共价键 一、问题的提出 两个主要的考虑方向 １．热力学条件 ２．动力学条件 Anfinsen实验变性蛋白的复性实验 从二硫键入手, 提出假设, 实验验证其正确性: 材料: 牛胰核糖核酸酶 含4对二硫键 26-84 40-95 58-110 65-72 Anfinsen实验 Anfinsen实验 巯基乙醇 Anfinsen实验 Anfinsen实验 Anfinsen实验 同时代取得的其它一些结果 折叠是以结构域为单位进行的。 ribonuclease A 去除 5 C-末端残基后, 蛋白质就丧失了正确形成二硫键的能力。 (H. Taniuchi, J. Biol. Chem. 245, 5459-5468; 1970) 含有两个或多个结构域的蛋白质，相邻结构域的解折叠是近似相互独立的。 Levinthal Paradox 对一个100个氨基酸残基的小蛋白质链 假设：只有主链二面角?和?可以转动 每个二面角只有3个可能值 则：总构象数为 3200 如果：每转动一次时间为10-15秒 则：历遍所有构象约需1072年 而：宇宙年龄为1.5?1010 三、 折叠的动力学考虑 有无中间体？ 最低自由能构象能否达到？ 折叠过程是怎样的？ 折叠中间态的发现 首先在折叠、去折叠的早期动力学时(快速反应)中发现。(Cytochrome c: A. Ikai and C. Tanford, Nature 230, 100-102; 1971; ribonuclease A: T. Y. Tsong, R.L. Baldwin and E.L. Elson, PNAS 68, 2712-2715; 1971) 折叠中间态? 快速检测蛋白质折叠的方法 通过二硫键捕捉中间体－－捕获二硫键 蛋白质折叠过程的时间尺度 能量偏移限制了折叠过程中对不合理构象的尝试 对蛋白折叠过程的共识－－两种过程 成核：小蛋白 多步：大蛋白，以结构域为单位 蛋白质折叠的现代研究 从头算(ab initio )预测1D-3D 目标：疏水表面埋藏最大，loop熵减最小 设计新的蛋白质结构 构象病的研究 蛋白质错误折叠产生淀粉样纤维，导致构象病， eg:Alzheimers and Parkinsons diseases (J.W. Kelly, Nature Struct. Biol.9, 323-325; 2002). 折叠过程的动力学模拟 “辅助性组装学说” 相对于“自组装”学说，认为 蛋白质多肽链的正确折叠和组装需要其他蛋白质分子的帮助，分子伴侣与折叠酶一起，构成了两种重要的辅助折叠分子。 折叠酶 折叠酶催化蛋白质折叠过程中共价键的异构化，主要有有PDI和PPI。 PPI，脯胺酰顺反异构酶 PDI，二硫键异构酶 定　　义 一类在序列上没有相关性但有共同功能的蛋白质，它们在细胞内帮助其他含多肽的结构完成正确的组装，而且在组装完毕后与之分离，不构成这些蛋白质结构执行功能时的组份. 分子伴侣的特征 分子伴侣的分类 伴侣素家族 (Charperonin,Cpn) GroE(Hsp6 0 )家族和 Tric家族 热休克蛋白 70家族(Hsp70) 热休克蛋白 90家族(Hsp90) 其它种类的分子伴侣 五、蛋白质折叠/去折叠的实验研究方法 Fast/Ultra fast mixingStopped-flow, quench flow, continuous flow,.. T-jumpelectrical-discharge-induced T-jumpLaser-induced T-jump OthersLaser flash photolysisMechanic unfolding…… Stopped-flow 典型停流实验结果 Continuous-Flow 时间分辨CD Quench-flow H/D exchange T-jump Mixing Electrical-discharge