131I- Rituximab对B细胞淋巴瘤生物学效应的实验研究_0.docVIP

131I- Rituximab对B细胞淋巴瘤生物学效应的实验研究 作者：蔡秋琼，杜明华，陈宝安，钟英，黄科，屈海船 【摘要】 目的: 研究 131I标记的Rituximab对B细胞淋巴瘤细胞的生物学效应以及对荷人Raji细胞移植瘤裸鼠的放射免疫 治疗 效果，为放射免疫导向治疗提供实验依据。 方法 ：体外培养人B细胞淋巴瘤细胞系Raji细胞，裸鼠皮下接种Raji细胞成瘤，IODO- GEN法将131I标记于Rituximab，将细胞分为131I- Rituximab组、单纯抗体组、单纯核素组及空白对照组4组，流式细胞仪检测各组Raji细胞凋亡和细胞周期；取30只成瘤裸鼠随机分成高、中、低剂量治疗组及单纯抗体组、单纯核素组、空白对照组6组，进行裸鼠的放射免疫治疗研究。每周测量裸鼠荷瘤大小1次,4周后处死裸鼠,取瘤称重，常规病理 分析 。结果：131I- Rituximab组凋亡率高于其他各组；131I- Rituximab组细胞周期发生变化，大部分被阻滞在G2期。裸鼠各治疗组与对照组比较，肿瘤生长减慢,肿瘤生长抑制率具有剂量时间依赖性,组织病 理学 检测显示治疗有效。结论：131I- Rituximab能够诱导Raji细胞凋亡并调控细胞周期，而且可特异性地定位于肿瘤组织,发挥放射免疫导向治疗作用,具有潜在的临床 应用 价值。 【关键词】 放射免疫治疗； B细胞淋巴瘤； 抗CD20单克隆抗体； 131I-Rituximab 非霍奇金淋巴瘤（NHL）是最常见的淋巴系统恶性肿瘤之一，其绝大多数是B细胞来源，放射免疫治疗（RIT）属于内照射治疗，已成为 目前 B细胞NHL治疗的研究热点。本实验将Rituximab-人鼠嵌合型抗CD20单克隆抗体偶联放射性核素131I，从体外和体内实验两方面研究其对B细胞淋巴瘤的生物学效应。 1 材料与方法 1.1 细胞与实验动物 人B淋巴瘤细胞系Raji细胞购于 中国 科学 院上海细胞研究所；BALB/c裸鼠（4～6周龄）购于中国科学院上海实验动物中心，于东南大学医学院SPF动物房饲养。 1.2 主要试剂及器材 Rituximab购于罗氏制药公司，Na131I购于南京森科公司，Iodogen(四氯二苯基甘脲)由苏州大学医学院核医学实验室提供，流式细胞仪为FACS Vantage SE型，SPECT显像仪为德国西门子公司E.CAM9358型。 1.3 细胞培养 用含10%胎牛血清、100 U·ml-1青霉素、100 U·ml-1链霉素的RPMI 1640培养液，在37 、5%CO2、95%湿度的培养箱中培养，2～3 d传代1次，取对数生长期细胞用流式细胞仪测定CD20表达率。 1.4 131I- Rituximab的制备 应用IODO- GEN法［1］标记，标记产物经Sephadex G- 25分离纯化，检测标记产物的标记率及放射化学纯度。 1.5 体外实验 1.5.1 分组 细胞换液后24 h，将细胞浓度调整为1×106 ml-1,分为4组。A组（131I- Rituximab组）：将131I- Rituximab加入Raji 细胞中，使131I- Rituximab的最终比放射性活度为3 μCi·ml-1（1 Ci=37 GBq），Rituximab的最终浓度为50 μg·ml-1；B组（单纯核素组）：将Na131I加入Raji细胞中，使Na131I的最终比放射性活度为3 μCi·ml-1；C组（单纯抗体组）：将Rituximab加入Raji细胞中，使Rituximab的最终浓度为50 μg·ml-1；D组（空白对照组）：加入等量培养液。上述各组剂量参照 文献 ［2］确定。 1.5.2 观察指标 加药24 h后显微镜下观察细胞形态，流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期：以Annexin - FIFC/PI双染法测定药物对细胞的早期诱导凋亡作用，采用DNA倍体分析法检测细胞周期，重复测定3次。 1.6 体内实验 1.6.1 B细胞淋巴瘤动物模型的建立 将处于对数生长期的Raji细胞，用不含血清的RPMI 1640调整细胞密度为1×107 ml-1,每只裸鼠皮下接种0.2 ml,30 d后部分裸鼠成瘤，挑选肿瘤直径约为0.8 cm的30只成瘤裸鼠进行实验分组。 1.6.2 实验动物分组 成瘤裸鼠模型随机分为6组（每组5只）。a组（高剂量组）：尾静脉注射131I- Rituximab 400 μCi；b组（中剂量组）：尾静脉注射131I- Rituximab 150 μCi；c组（低剂量组）：尾静脉注射131I- Rituximab 50 μCi；d组（单纯抗体组）：尾静脉注射Rituximab 0.8 mg；e组（单纯核素组）：尾静脉注射Na131I 150 μ