转水稻粗缩病毒运动蛋白缺陷型基因玉米的二重PCR检测.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（５）：８３～８６ 转水稻粗缩病毒运动蛋白缺陷型基因 玉米的二重ＰＣＲ检测  杜建中 　孙　毅　郝曜山　贺　健 （山西省农业生物技术研究中心　太原　０３００３１） － 摘要　以外源基因（ＲＤＶＭＰ ）和玉米内源基因Ｚｅｉｎ作为ＰＣＲ扩增对象，旨在建立一种简便有效 － 的转基因玉米及其产品的二重ＰＣＲ检测技术。转外源基因（ＲＤＶＭＰ ）材料的常规ＰＣＲ检测结 果证明外源基因在转基因材料中可稳定遗传；对常规ＰＣＲ检测的阴性结果材料进行二重ＰＣＲ检 测，扩增结果除进一步证实常规ＰＣＲ检测的阴性结果结论外，还证明提取的植物总ＤＮＡ质量符 合试验要求，进而从二重ＰＣＲ检测结果还得出常规ＰＣＲ检测的阴性结果出错率为１．４％。此方 法简单，实用，结果可靠，可适用于转基因植物及产品的检测。 － 关键词　水稻粗缩病毒缺陷型基因（ＲＤＶＭＰ ）　玉米　二重ＰＣＲ扩增　假阴性 中图分类号　Ｑ７８９ 　　植物基因工程在作物育种中的应用日趋广泛，在 （ＥｕｒｏｐｅａｎＣｏｍｍｉｓｓｉｏｎ）；我国于２００１年发布了《农业转 培育抗逆性作物品种，改良和提高作物品质等方面取 基因生物标识管理办法》，规定凡是在中国境内销售的 得了巨大成就，涉及的作物有玉米、大豆、棉花和油菜 大豆及其制品若属转基因生物，就必须进行标识。 等，种植范围由最初的少数几个国家发展到２００６年的 　　转基因标识管理的关键是进行有效的检测。现已 ２０多个，其中种植面积较大的前５个国家是美国、加拿 发展出多种定量ＰＣＲ技术［１～４］，其中，竞争ＰＣＲ是一 大、阿根廷、巴西和中国。全球转基因作物种植面积也 ［５］ 种比较常用的定量方法 ，但它只是“终点法”定量， 由１９９６年的１７０万公顷，发展到２００６年的１０２００万公 不能对扩增过程进行动态检测。目前较多应用ＴａｇＭａｎ 顷，仅我国２００６年转基因作物种植面积就达到３８０万 实时荧光定量技术［６，７］，这些方法检测特异性高，结果 公顷。目前，转基因作物多以抗除草剂、抗虫为主。转 较可靠，但却存在淬灭不彻底、合成和标记复杂、成本 基因作物育种在提高作物产量、解决温饱问题、加强环 高和仪器昂贵等缺点。常规ＰＣＲ技术应用广泛，不过 境保护和降低生产成本等方面都作出了很大贡献。取 存在着可能出现假阳性和假阴性结果的问题。与常规 得了巨大的经济效益和社会效益。 ＰＣＲ相比，多重ＰＣＲ扩增由于同时涉及到了多个模板 　　但是，转基因作物的发展还局限在有限的地区和 ［８］ 和多对引物 ，因此可避免扩增结果出现假阴性。 个别作物上，涉及的性状也主要集中于抗除草剂、抗虫 　　本研究将常规 ＰＣＲ技术与二重ＰＣＲ扩增技术结 等方面。因此，转基因作物的发展潜力仍很大。不过