鲫鱼血清和皮肤粘液IgM分离纯化及部分性质鉴定.pdfVIP

维普资讯 动 物 学 研 究 2003，Apr．24 2【)：111—115 CN53--lO4O／Q ISSN0254--5853 zoolOgicaIResearch 鲫鱼血清和皮肤粘液 IgM 的分离纯化及部分性质 的鉴定 陈 矗 ，王石泉 ，韩晓冬 ，侯亚义 (1．南京大学 生物化学系，江苏 南京 210093；2．南京大学 医学院免疫生物学实验室 ，江苏 南京 210093) 摘要 ：采用盐析法结合葡聚糖凝胶柱 ，分离纯化鲫鱼血清 IgM；然后制备兔抗鲫鱼血清 IgM 多克隆抗体 ， 将其偶联到Sepharose4B上制成亲和柱，用于分离纯化皮肤粘液 IgM。结果表明：33％一45％硫酸铵溶液沉淀处 理可以去除鲫鱼血清中除IgM外的很多杂蛋白，再经葡聚糖凝胶柱纯化 ，IgM 纯度可达 80％以上 ，其重链和轻 链的分子量分别为79和25kDa；以兔抗鲫鱼血清 IgM 多克隆抗体亲和柱分离皮肤粘液 Igi，分离效果 良好 ， IgM重链的分子量为 88kDa；Westernblot显示兔抗鲫鱼血清 IgM多克隆抗体识别 的是血清和皮肤粘液 IgM的重 链部分。用 ELISA测定鲫鱼血清中IgM含量在一年中的变化 ，结果表明IgM在春夏季的含量高于秋冬季。 关键词 ：鲫鱼 ；血液 ；皮肤粘液 ；IgM；纯化 ’ 中图分类号 ：Q959．46 文献标识码 ：A 文章编号 ：0254—5853(2003)02—0111—05 Purification andPartialCharacterizationofImmunoglobulin M froqm CarraasssstiUuSsaauurraattuussSeerruumm aannd Skin M U1CUS CHEN Yaol，WANG Shi—quanl，HANXiao—dong ，H0UYa—vI2’3 (1．DepartmentofBiochemistry，NanjingUniversity，Nanjing 210093，China； 2．ImmunobiologyLaboratory，SchoolofMedicine，NanjingUniversity，Nanjing 210093，China ) Abstract：Serum IgM in Carassiusauratuswaspurifiedbyprecipitationofammonium sulfatesaturatedsolutionfol— lowedbySephadexG一200 chromatography．Thenwemaderabbitpolyclonal antibodyagainstserum IgM andlinked itto Sepharose4B tomadeaffinity column，withwhichIgM Was separatedfrom skin mucus．Theresultsshowedthatmna y otherproteinswereremovedfrom serum byprecipitationofammonium sulfate，IgM couldreachapurityofabove80％ by SephadexG一200 chromatorgaphypurifiedfurther，nad themolecularweightsofitsheavy chain and lightchainwere79 kDanad25kDarespectively．Th erba bitpolyclonal antibodyaffinitycolumn had good capacityofpurifyingskin mucus IgM 。whoseheavy chainwas,88kDa．Therba bitantibodyonlyrecognizesthehea