柴胡及其总多糖体外抗补体作用.pdfVIP

柴胡及其总多糖的体外抗补体作用1 1 1 2 1 徐晗 , 章蕴毅 , 张建文 , 陈道峰 * 1 复旦大学药学院，上海（200032 ） 2 美国BioCryst 药物有限公司生物部门，美国伯明翰（35244 ） E-mail ：dfchen@ 摘 要：为明确柴胡的抗补体作用，筛选出活性最强的品种，确定活性部位并初步定性其理 化特征。本文采用细胞溶血法考察3 个品种共 10 批次的柴胡水煎液浸膏对补体经典途经和 旁路途经激活引起的红细胞溶血的抑制作用；采用经典途径细胞溶血法检测活性最强的柴胡 分级提取所得各部位的抗补体活性，确定活性部位；采用硫酸－苯酚法和间羟联苯法分别测 定多糖部位的总糖和糖醛酸含量。结果显示小叶黑柴胡（Bupleurum smithii var. parvifolium ） 经典途径和旁路途径的抗补体活性均强于北柴胡(B. chinense) 和狭叶柴胡（B. scorzonerifolium ）；小叶黑柴胡的多糖部位活性最强，其总糖含量和糖醛酸含量分别为74.8% 和41.5% 。 关键词：补体抑制剂，柴胡，多糖，细胞溶血 中图分类号：R93 1. 引 言 补体系统的非正常激活会引起人体免疫系统的过度反应，造成人体自身正常组织的损 伤，参与多种疾病的病理过程，如老年性痴呆、系统性红斑狼疮、多器官功能衰竭综合症等。 在缺血性再灌注、急性呼吸窘迫综合征（ARDS ）、非典型肺炎（SARS）等急性疾病的发 生和发展过程中，补体的过度激活也起了重要作用[1-2] 。因此，研究开发有效的补体抑制剂 对于这些疾病的防治是非常重要的选择。作者从2003 年国家卫生部推荐的非典处方药材和 具有免疫调节作用的药材中选出了近30 种药材，采用细胞溶血法，分别考查了它们对补体 经典途经和旁路途经激活引起的红细胞溶血的抑制作用，发现柴胡具有显著的体外抗补体作 用。由于柴胡品种复杂，故本文收集了3 个品种共 10 批次的柴胡，比较其抗补体活性的品 种间差异，并确定其活性部位。 2. 材料与方法 2.1 ．材料 2.1.1. 试剂与仪器 Jouan MR22i型低温高速离心机（JOUAN公司，法国）；Well scan MK3型酶标仪（Thermo 【基金项目】高等学校博士学科点专项科研基金( No. 20040246079) ；国家自然科学基金（No.） Labsystems公司，芬兰）；Freezedryerl8 型冷冻干燥器(Labconco公司，美国) 。透析袋为Merck 公司产品(分子截留分5000～8000 Da)；半乳糖和半乳糖醛酸对照品购自中国药品生物制品 检定所；抗SRBC抗体(溶血素) 由复旦大学药学院药理学教研室章蕴毅副教授提供；巴比妥、 巴比妥钠、EGTA、三氯醋酸等试剂均为分析纯。 2.1.2. 动物 豚鼠（250～300 g ）和新西兰兔（2.5～3.0 kg ），雌雄不限，复旦大学实验动物部提供。 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金( No. 20040246079)和国家自然科学基金（No.）的 资助。 - 1 - 2.1.3. 植物材料 柴胡和麻黄药材购自上海华宇药业有限公司。柴胡药材由潘胜利教授鉴定（复旦大学药 学院生药学教研室）。麻黄药材由陈道峰教授（复旦大学药学院生药学教研室）鉴定。 2.2. 方法 2.2.1. 溶液配制 巴比妥缓冲液（barbitol buffer solution ，BBS ）：取巴比妥钠 2.875 g ，溶于250 ml 热水 中，再加入NaCl 42.5 g 、MgCl ·6H O 0.84 g、CaCl 0.14 g 、巴比妥 1.0 g ，补三蒸水至1000