从猪脑中提取纯化谷氨酸脱羧酶的研究.pdf

维普资讯 中华 内特 泌代谢杂志 1999年 8月第 15卷第 4期 C nJEndocrinolMetab，Au~st1999．Vol15，N · 论 著 · 从猪脑中提取纯化谷氨酸脱羧酶的研究 扬金奎 陈家伟 何戎华 【摘要】 目的 从猪脑中提取纯化谷氮酸脱羧酶 (GAD)，用于 1型糖尿病患者GAD抗体的测 定。方法 以猪脑制备GAD 粗酶，经SephedexG100、DEAE-Seohacel和羟基磷灰石凝胶层折分离纯 化 ，结台十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶 电泳(SDS)测定相对分子质量、同位素法测定 GAD 酶活性 建立 了GAD纯化方法 。结果 GAD 粗酶经纯化后的单位蛋 白量的酶活性增加 了 118倍 。 经 SDS分析，为一条相对分子质量约 64000的蛋白条带 。结论 用多步层析分离法从猪脑中 提取纯化 GAD是一种简便可行的方法。 【关键调】 各氨酸脱靛酶 纯化 糖尿病，1型 凝胶层折 P № HⅫ andideutifie~timaofglummicadddecarboxylasefrom i brain 玎 临Jirdeui，O-IEN Jia,,,ei砸 Ronghua DepartmentofEndocrinology theFirstAffiliatedHo*piud，NanjingMedialUni一 ， Naqing，210029 A【bstract] Objective Topurifyglutamicaciddecarboxylase(GAD )fromporcinebrainforthesakeof detecting GAD antibodiesinpatientswithtype1diabetesmeUitus Methods GAD wasobtainedfrc~n口orciI hralnasacrudeextractandpurifiedbyusingSephadexG100．DEAE—Sephacelandcalcium phosphatechro— matngraphy Sodiml~dudecy[sulfate-polyacrylamidegele]ectrophoresis(SDS)andGAD activityassav wereadoptedtOidentifythispurifide enzyme Rtsnlts W iththismethod specificactivityofGAD increased hy118-foldanditconsistde ofasing lebandaround64000OnSD$．Condmion it asimpleand usefulm~todtopurifyGADfromporcinehrainbymulti-stepchromatngraphy 【Keywo~sl Glutanficaciddecarhoxylase PuBcat Diabetesmdlitus，type 1 Gelghzo- matngraphy (ChinJEndocr／notM．tab，1999，15：236～239) 1型糖尿病是一种 自身免疫性疾病。患者血清 材料和方法 中可存在多种与 1型糖尿病发病有关的自身抗体 。 其中，64kD抗体 (群)(64kDantibodies，64kAs)，各 一 、 材料 氨酸脱羧酶(GAD)抗体对于 1型糖尿病的预测及 聚丙烯酰胺 (丙烯酰胺及 甲叉双丙烯酰胺)为德 早期诊断和鉴别诊断具有重要的临床应用价值 |I】。 国Fluka公司产 品。L-1一C-谷氨酸为 Amerash公 1990年证实，64kD蛋白为GADt2]。GAD 是合成一 司产 品。SDS、Sephade