复合型组织工程皮肤的体外快速构建.pdf

, 2007, . 21, . 4 4·06 · Ch inese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery A p ril V o l N o 复合型组织工程皮肤的体外快速构建 杨斌　洪清琦　丘 日升　张琳　董月桐 　　【摘　要】　　 目的　寻找一种体外快速构建复合型组织工程皮肤的方法, 为大面积烧伤、创伤创面的覆盖提供足够 的自体皮源。　方法　取人的包皮, 进行表皮细胞及成纤维细胞的分离鉴定及体外培养扩增, 对表皮细胞群行广谱角蛋 ( ) ( ) 白抗体异硫氰酸荧光素 、角蛋白19 19, 19 免疫荧光染色及 19 fluo rescein iso th iocyanate F ITC cytokeratin K F ITC K 流式细胞仪鉴定; 对成纤维细胞行波形蛋白 免疫荧光鉴定。将表皮细胞接种于异体脱细胞真皮( F ITC acellular derm al , ) 乳头面, 于气液平面培养构建表皮层, 实验分两组进行, 实验组培养基中添加25 角化细胞生长因子 m atrix ADM ng m l (keratinocyte grow th facto r, KGF ) , 对照组不添加。6 d 后, 接种成纤维细胞于两组ADM 的另一面, 继续培养24 h 。收集 构建的组织工程皮肤, 切片行苏木素伊红染色, 观察所构建皮肤的镜下结构, 并对比添加KGF 对其影响。　结果　免疫 荧光染色培养扩增的表皮细胞群广谱角蛋白抗体 染色均为阳性、 19 染色部分阳性, 流式细胞仪鉴定其中 F ITC K F ITC 19 阳性表达的细胞接近 17% 。成纤维细胞体外培养7 可扩增超过 100 倍, 波形蛋白 免疫荧光染色呈阳性。经 K d F ITC 过7 d 的体外培养构建, 可以得到复合型皮肤, 经苏木素伊红染色镜下观察显示, 实验组表皮层连续, 形成细胞层数2～ 3 层的复层结构, 真皮中含有成纤