布鲁氏菌BP26基因标记疫苗株的构建及鉴别PCR方法的建立.pdf

Short Co mmunicatio n 研究简报 微生物学报 Acta Microbiologica Sinica ( ) 49 3 : 405 - 409 ; 4 March 2009 ISSN 0001 - 6209 ; CN 11 - 1995Q http :journals. im. ac . cnactamicrocn 布鲁氏菌 BP26 基因标记疫苗株的构建及鉴别 PCR 方法的建立 1 # 2 # 2 # 1 1 1 1 2 1 汪舟佳 ,甄清 ,乔凤 ,王玉飞 ,杜昕颖 ,钟志军 ,赵瑾 ,于雅琴 ,黄留玉 , 1 1 孙岩松 ,陈泽良 (1 军事医学科学院疾病预防控制研究所 ,北京 100071) (2 吉林大学公共卫生学院 ,教育部重点实验室 ,长春 130021) 摘要 :【目的】由于现有的减毒活疫苗仍存在较强的毒力 , 因抗原与毒株的差异不大而很难区分疫苗免疫和 自然感染等缺点 ,限制了现有布鲁氏菌减毒活疫苗的广泛应用 。本文拟对布鲁氏菌的减毒活疫苗株 M5 进 行遗传改造 ,克服这些缺点 。【方法】本研究利用同源重组的方法 ,用卡那抗性基因替换了布鲁氏菌减毒疫 Δ 苗株 M5 的BP26 基因 ,得到了新的标记疫苗株 M5 BP26 。分别用标记疫苗株和野生株侵染巨噬细胞和感染 小鼠, 比较分析标记株在细胞内和小鼠体内的存活能力 。根据种特异性保守基因 dnaK 和缺失的BP26 基因 设计引物 ,建立双重 PCR ,用于区分标记株与野生株 。【结果】成功构建了BP26 基因标记疫苗株 ,细胞实验和 动物实验结果表明 ,标记株仍能在胞内和小鼠内存活 ,具备作为减毒活疫苗的特性 。小鼠实验结果显示 ,感 29 11 ( ) 22 染后两周野生株的细菌数为 10 ,而突变株为 10 P 001 ,至第 3 周野生株的细菌数为 10 ,而突变株未 能检出 ,表明与原疫苗株相比,标记株的感染力进一步减弱 。根据 DNA 序列的差异 ,建立了能够区分标记疫 苗株与野生株的双重 PCR 方法 ,标记株因只能扩增出一条带而能与野生株和毒株相区分 ,从而可以区分 自 然感染和疫苗免疫 。【结论】基因标记疫苗株的构建及鉴别 PCR 方法的建立 ,为布鲁氏菌疫苗的进一步研发 奠定了基础 。 关键词 : 布鲁氏菌 ;26 kDa 外膜蛋白;标记疫苗株 中图分类号 : R37 　　文献标识码 :A 　　文章编号 (2009) 　　布鲁氏菌引起的布鲁氏菌病是典型的人兽共患 断传播途径 ,开展布鲁氏菌病的治疗工作 ,具有十分 传染病 ,给我国畜牧业生产造成巨大的经济损失 ,也 重要的意义[ 1] 。针对布鲁氏菌病的诊断以及布鲁氏 严重威胁人民的健康生活 ,是一个重要的公共卫生 菌的检测的研究一直在进行 ,也取得了一些重要进 问题 。近年来 ,人间布鲁氏菌病的发病数一直呈上 展 ,这些方法在布鲁氏菌病的诊断和监测中发挥了 升趋势 , 已超过历史最高水平 。人布鲁氏菌病主要 重要作用[2 - 4 ] 。布鲁 氏菌病是一种慢性传染性疾 来源于动物布鲁氏菌病 ,因此 ,尽管没有完整的监测 病 ,预防该病的发生是控制该病的重要措施 。布鲁 体系 ,但可以预测动物间的布病发病率也很高 。准 氏菌病的预防主