3血清蛋白盐析及分子筛层析脱盐.pptxVIP

血清蛋白盐析及分子筛层析脱盐;血清蛋白盐析及分子筛层析脱盐A、蛋白质盐析原理  本实验先用盐析法对血清蛋白进行初步分离，在半饱和硫酸铵溶液中，血清白蛋白不沉淀，而球蛋白沉淀。离心后，白蛋白主要在上清液中，沉淀的球蛋白加少量蒸馏水使之溶解。由于血清白蛋白和球蛋白的分子量比硫酸铵大的多。因而，可用分子筛层析法除去盐析后的白蛋白或球蛋白样品中的硫酸铵，使白蛋白或球蛋白得以进一步纯化。;B、分子筛层析（Molecular chromatography）基本原理： 分子筛层析又称凝胶排阻层析(Gel exclusion chromatography)、凝胶过滤（Gel filtration） 分子筛层析是指混合物随流动相经固定相（凝胶）移动时，混合物中各组份按其分子大小不同而被分离的技术。凝胶是一种不带电荷的具有三维空间结构的多孔网状物质。凝胶的每一个颗粒的细微结构就像一个筛子，小的分子可以进入凝胶网孔而大的分子则被排阻于凝胶颗粒之外，因而具有分子筛作用，又因整个层析过程一般不变换洗脱液，好像过滤一样，故也称凝胶过滤。 ; 当含有大小不同分子的混合物加到层析柱中，这些物质随洗脱液的流动而移动。由于大分子物质（分子量大）不能进入凝胶颗粒内部，就沿着凝胶颗粒间隙随流动相（或洗脱液）移动，流程