推拿加功能训练对膝骨关节炎家兔模型关节液中细胞因子的影响.docVIP

推拿加功能训练对膝骨关节炎家兔模型关节液中细胞因子的影响 【摘要】 　　目的观察推拿加功能训练对膝骨关节炎家兔模型关节液中细胞因子IL-1β和TNF-a的影响，探讨推拿加功能训练 治疗 膝骨关节炎的机制。方法将新西兰大白兔40只随机分为空白对照组(A组)、模型对照组(B组)、电针治疗组（C组）、手法治疗组(D组)。除A组外，其余3组将大白兔左膝关节伸直位石膏固定7周制成骨性关节炎动物模型，造模成功后,A组和B组正常饲养,不处理；C组电针治疗，D组给予推拿手法加功能训练治疗，连续治疗21 d。处理前、后分别取各组家兔关节冲洗液，采用放射免疫分析法（RIA），测定关节冲洗液中IL-1β和TNF-a的含量。结果经治疗后，C、D组与A、B组比较有显著性差异(P0.05)；D组治疗前后有显著性差异(P0.05)。结论推拿加功能训练治疗能降低膝骨关节炎关节液中细胞因子IL-1β和TNF-a的含量,从而发挥对膝骨关节炎的防治作用。 【关键词】 膝骨关节炎 推拿手法 细胞因子 　　膝关节骨性关节炎(Knee Osteoarthritis，KOA) 是临床中常见的关节疾病，好发于中老年人，是由于关节滑膜退变，软骨破坏引起的以膝关节疼痛、僵硬和活动受限为特征的慢性骨关节病，主要病变为膝关节软骨退行性变和继发性骨质增生。近年来,临床上不断报道用针灸、推拿加功能训练及针刀等方法治疗膝骨关节炎取得较好疗效［1］。研究发现，细胞因子IL-1β及TNF-a是参与骨性关节炎进程的重要介质, 是炎症反应的重要调节剂，是调节炎症的始动因素，与软骨破坏密切相关［2］。本实验研究推拿加功能训练对膝骨关节炎家兔模型细胞因子的影响,旨在证实推拿手法治疗膝骨关节炎的疗效，探讨膝骨关节炎的发病机理。 　　 1 材料与仪器 　　1.1 仪器与试剂IL-1β和TNF-α放射免疫测定药盒从解放军总 医院 放免研究所购买，采用放射免疫分析法（RIA），放免测定程序按试剂说明书进行。离心机(中佳公司,KDC-2046型)、电针仪(广东省汕头市医用设备厂, 6805-β)和放射免疫γ计数器(众城公司, DFM-96型10管)等。 　　1.2 动物健康新西兰大白兔40只(从重庆医科大学动物中心购买)，雌雄各半，雌无孕，体重2.0～2.5kg。随机分为空白对照组（A）、模型对照组（B）、电针治疗组（C）和手法治疗组（D），每组10只。造模成功后C，D两组每只分别给予电针或手法治疗，1次/d。 　　 2 方法 　 　　2.1 动物模型实验动物同等条件下稳定饲养7 d后，B，C，D组按照膝关节石膏制动法造模。先剪去所有动物左后肢踝关节以上的兔毛，用管型石膏将其左后肢伸直位固定，石膏外以透明胶纸封好，以防兔撕咬，若石膏松动或脱落者及时重新固定。制动满7周后，随机从A，B，C，D组各抽出1只动物处死，取关节软骨作病理检查以观察造模情况，确定模型成功后解除石膏外固定。 　　2.2 组织学检查分别于造模成功后和治疗结束后随机从B，C，D各组中抽出1只家兔处死，处死后立即切取家兔胫骨平台内侧关节面的完整软骨及软骨下骨组织标本，用10％的甲醛溶液固定48 h，脱钙2～3 d，石蜡纵向包埋固定，常规切片，HE染色。观察滑膜与软骨的病理变化［3］。 　　2.3 推拿加功能训练方法D组每天用按摩、揉捏、点压、分筋、理筋等手法以松解股四头肌，顺逆时针旋揉髌骨，再作内旋内收、外展外旋、屈伸髋和膝关节各5次，15 min/次，最后平地赶跑100 m，治疗1次/d，连续治疗21 d；C组参照《实验针灸学》［4］与《动物针灸学》［5］,取左后肢“内外膝眼、阳陵泉、血海、足三里和梁丘”6个穴位。以30号、1寸毫针针刺，得气后，针柄接电针治疗仪，电压6 V，疏密波型，频率1.6～2 Hz，输出调节强度1～2,以局部皮肤肌肉轻微颤动为度，1次/d，留针30 min/d，连续治疗21 d。 正常组、模型组正常饲养。 　　2.4 关节液标本采集分别于造模成功后及治疗结束后采集A，B，C，D四组的关节液，获得4组动物膝关节冲洗液，回收量0.4～0.6 ml，平均0.5 ml，于-20低温冰箱中保存待测。具体方法：施行膝关节穿刺，证实刺入关节腔后，注入0.9%的生理盐水0.5 ml，反复回抽、注入3次后，再尽量抽出腔内液体。抽取关节液后，每只兔肌注2万单位庆大霉素，以防膝关节感染。采用放射免疫分析法（RIA）处理标本，放免测定程序按试剂说明书进行［6］。 　　2.5 统计学处理方法所有实验数据用SAS9.0以上软件进行分析,以±s表示,组间差异采用方差分析(ANOVA)中的SNK法,各组治疗前后差异采用t检验，以P0.05作为显著性差异的标准。 　 　3 结果 　　3.1 病理切片观察造模后随机从各组中取出1只动物