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海蛇干体的化学成分研究 【摘要】 　　目的对海蛇干体的化学成分进行分离和鉴定。方法对海蛇干体的活性部位利用硅胶柱层析法和重结晶法进行分离纯化，通过理化常数测定和波谱分析鉴定其化学结构。结果从海蛇干体的醋酸乙酯部位分离得到5个化合物，即胆甾醇（）、1-甲基海因（II）、神经酰胺化合物（）、对羟基苯乙酸（）、对羟基苯乙酸甲酯（）。结论1-甲基海因（II）、对羟基苯乙酸（）、对羟基苯乙酸甲酯（）为首次从海蛇中分离得到，且1-甲基海因（II）为首次从海洋生物中分得。 【关键词】 海蛇；化学成分 　　海蛇药用始载于唐代陈藏器的《本草拾遗》，作为祛风燥湿、通络活血、攻毒和滋补强壮等功效的良药［1］。 现代 药理研究表明海蛇具有免疫调节［2］、抗菌抗炎［3］、对神经系统影响［4］、抗疲劳等［5］作用。目前，海蛇尚未被《 中国 药典》（2005版）收载。本实验对海蛇化学成分做了系统研究，在醋酸乙酯部位分离得到5个化合物，经理化常数和波谱数据鉴定为：胆甾醇（）、1-甲基海因（II）、神经酰胺化合物（）、对羟基苯乙酸（）、对羟基苯乙酸甲酯（）。其中1-甲基海因（II）、对羟基苯乙酸（）、对羟基苯乙酸甲酯（）为首次从海蛇中分离得到，且1-甲基海因（II）为首次从海洋生物中分得。 　 　1 仪器材料 　　Perkin-Elmer Lambda35 紫外/可见分光光度计；Perkin-Elmer Spectrum One型傅立叶变换红外光谱仪；岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪；Bruker Bio TOF Q-ESI质谱仪；Avance Bruker 600兆核磁共振波谱仪；SGW X-4显微熔点仪（上海）；BP211S型（Max220g，d=0.1mg） 电子 分析天平（德国Sartorius）；RE-5299旋转蒸发仪（郑州）等。柱层析硅胶200-300目（青岛海洋化工厂）；薄层层析硅胶G、H（青岛海洋化工厂）；薄层层析硅胶预制板（德国Merck公司）；乙醇、甲醇、丙酮、正丁醇、醋酸乙酯、石油醚（60～90）等均为分析纯。 　　海蛇购于市场，经成都中医药大学李敏教授鉴定为眼镜蛇科海蛇亚科青环海蛇Hydrophis cyanocinctus（Daudin）和平颏海蛇Lapemis hardwickii（Gray）去除内脏后的干燥体。 　 　2 方法与结果 　 　2.1 提取与分离取去除头部的海蛇干体5 kg，粉碎。用50%的乙醇回流提取，合并提取液，减压回收溶剂得到乙醇提取浸膏。将浸膏用适量水溶解后，依次用石油醚、醋酸乙酯萃取，减压回收溶剂，得醋酸乙酯部位浸膏。取该浸膏30 g，加硅藻土拌匀后减压干燥。经石油醚-醋酸乙酯梯度洗脱和重结晶得到5个化合物，分别为胆甾醇（）、1-甲基海因（II）、神经酰胺化合物（）、对羟基苯乙酸（）、对羟基苯乙酸甲酯（）。 　　2.2 结构鉴定 　　2.2.1 化合物无色针晶，mp147～149，TLC上硫酸烘烤显紫红色，Liebermann-Burchard反应呈阳性。Ei-MS m/z：387［M＋1］＋。1H-NMR δ：0.68 (3H，s，H-18)，0.86(d，6H，J = 6.5 Hz，H-26，27 )，0.91 (d，3H，J=6.6 Hz , H-21)， 1.01 (3H，s，H-19) , 3.52（1H，m），5.35 (1H，t) ；13C-NMR δ 37.2（C-1），31.7（C-2），71.8（C-3），42.3（C-4），140.8（C-5），121.7（C-6），31.9（C-7），31.9（C-8），50.2（C-9），36.5（C-10），21.1（C-11），39.8（C-12），42.3（C-13），56.8（C-14），24.3（C-15），28.2（C-16），56.2（C-17），11.9（C-18），19.4（C-19），35.8（C-20），18.7（C-21），36.2（C-22），23.8（C-23），39.5（C-24），28.0（C-25），22.5（C-26），22.8（C-27）。以上数据与 文献 ［6］报道的胆甾醇（Cholesterol）一致，故确定为胆甾醇（Cholesterol）。 　　2.2.2 化合物II无色晶体，mp156～157。EI-MS m/z：114（M+）。1H-NMR δ：2.91 (3H，s，－CH3)，3.95(2H，s，-CH2-) ；13C-NMR δ157.9（C-2），172.4（C-4），52.5（C-5），27.8（C-6）。数据与合成品1-methylhydantoin一致，确定为1-甲基海因（1-methylhydantoin）。 　　2.2.3 化合物白色无定形固体，m