细胞生物学实验技术.pptVIP

第三章细胞生物学实验技术 METHODS AND TECHNIQUES 第三节 细胞分离技术 一、离心技术 （一）差速离心 Differential centrifugation 特点： 介质密度均一； 速度由低向高，逐级离心。 用途：分离大小相差悬殊的细胞和细胞器。 沉降顺序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高基体——核蛋白体。 可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。 （二）密度梯度离心 1、速度沉降 velocity sedimentation 2.等密度沉降 isopycnic sedimentation 用途：分离密度不等的颗粒。 特点： 介质密度较高，陡度大，介质的最高密度应大于被分离组分的最大密度。 所需的力场通常比速率沉降法大10~100倍，往往需要高速或超速离心。 原理：样品各成分在连续梯度的介质中经过一定时间的离心则沉降到与自身密度相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密度的成分分离。 二、流式细胞术 三、细胞电泳 原理：在一定PH值下细胞表面带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动。 各种细胞或处于不同生理状态的同种细胞荷电量有所不同，故在一定的电场中的泳动速度不同 。 用途：检测细胞生理状态和病理状态、分离不同种类的细胞，如分离哺乳动物的XY精子。 * * 是分离细胞器（如细胞核、线粒体、高尔基体）及各