登革病毒感染HepG2-严重联合免疫缺陷小鼠模型的建立.pdfVIP

陈艳富，等:登革病毒感染 HepG2-严重联合免疫缺陷小鼠模型的建立 • 17 • 小鼠建立了 DENV 感染动物模型[幻，但该模型小鼠 度(optical density ,OD)值。 1. 2. 3 HepG2-SCID 小鼠的 DENV2 感染将移植 有后肢麻痹的神经系统损伤症状，脾脏注射操作亦 成功的 HepG2-SCID 小鼠随机分成 3 组，每组 7 较繁琐，客观上限制了其广泛应用。本研究拟对上 只。 A组不进行病毒接种，用于观察移植 HepG2 述模型改良，用腹腔移植方法代替脾脏注射，建立 细胞生长对小鼠一般状态的影响;B 组用于观察 DENV 感染动物模型;同时，通过观察 DENV 感染 DENV2 感染对 HepG2-SCID 小鼠病死率的影响; 小鼠的疾病特点，病毒在体内的分布和主要组织、器 C 组用于检测 DENV2 感染后病毒在小鼠体内的增 官的病理变化，对模型进行评价，期望为 DENV 致 殖情况及器官损伤情况。 B 组和 C 组的感染实施 病机制的研究提供更为理想的工具和平台。 方法为:于移植后第 10 天，无菌条件下腹腔接种 1 材料与方法 6 DENV2，剂量 1 x 10 PFU/只，无菌环境下继续饲 1. 1 材料 养，每天记录小鼠一般情况;A 组接种同等容量的 1. 1. 1 细胞株与病毒株 白纹伊蚊细胞株 C6/36 、 细胞培养液。 1. 2. 4 病毒滴度测定 于 HepG2-SCID 小鼠感染 非洲|绿猴肾细胞株 Vero 由本实验室保存。人肝癌 DENV2 后的第 7 天，乙酷麻醉，用眼球摘除法取血 细胞株 HepG2 购自美国标准生物品收藏中心 CAmerican Type Culture Collection , ATCC) 。 并分离血清，用病毒空斑实验Cplaque assay) 检测小 鼠外周血中病毒滴度。 DENV2CTr1751 株)由日本同立传染病研究所保井 1. 2. 5 HE 染色 DENV2 感染 HepG2-SCID 小 孝太郎教授惠赠。在 C6/36 细胞中增殖 DENV2 ， 0 7 天，处死小鼠后进行解剖，取肝脏、脑组织， 鼠后第 然后将病毒保存于-80 C备用。 1. 1. 2 实验动物 6 周龄无特定病原体C specific 以常规方法脱水、透明，石蜡包埋。切片经脱蜡处理 pathogen free ,SPF)级雌性 SCID 小鼠购自北京维 后先后置于苏木精(hematoxylin ， H) 、伊红(eosin ， E)染液中染色，普通光学显微镜镜检。 通利华实验动