黄曲霉毒素B1高效降解菌株的筛选鉴定及其降解.pdfVIP

第35卷 第2期 华 中 农 业 大 学 学 报 Vo1．35 NO．2 2016年 3月 JournalofHuazhongAgricuhuralUniversity Mar．2016，90～ 96 黄 曲霉毒素 B1高效降解菌株 的筛选鉴定及其降解 关 心 何剑斌 董 双 臧 健 龙 淼 1．沈阳农业大学畜牧兽医学院，沈阳 110866；2．沈阳农业大学分析测试中心，沈阳110866 摘要 以香豆素为唯一碳源，利用微生物去毒法，初步筛选出32株生长 良好的活性菌株，再添加 AFBI标 准品(菌液毒素终质量浓度2。5 g／mL)，通过高效液相色谱 (HPLC)检测AFB1降解率，结果显示，从鸡粪中分 离并命名为F6的菌株高效降解黄曲霉毒素R1，降解率达83 。对菌株F6进行细胞形态及生理生化特性鉴定， 初步判断为芽胞杆菌属，16SrRNA序列同源性 比对分析，与蔬菜芽胞杆菌国际标准株 ATCC700005(登录号 NR043325．1)核苷酸同源性为 99．3 ，由此可确定，F6菌株为蔬菜芽胞杆菌，命名为BacillusoleroniusGX01 (登录号 KP297896)。分离菌株 F6发酵液各组分，检测得上清液 AFB1降解率达 83 ，而菌悬液、胞 内液的 AFB1分别仅为22．8 、17．4 ，初步鉴定其降解活性成分可能为胞外酶。 关键词 黄曲霉毒素B1；生物降解；蔬菜芽胞杆菌；分离；鉴定 中图分类号 S852．6 文献标识码 A 文章编号2016)02—009007 黄曲霉毒素(aflatoxin，简称 AFT)属于真菌毒 适合霉菌的生长，极易受到黄霉菌毒素的污染，因 素_】]，是由黄 曲霉 (Aspergillus ＆ s)、寄生曲霉 此，黄曲霉毒素解毒至关重要 。国内外去除黄曲霉 (Aspergillusparasiticus)、集蜂曲霉 (Aspergillus 毒素的方法主要有紫外线照射、热处理、吸附剂脱毒 nOITliUS)和溜 曲霉 (Aspergillustamarii)等丝状真 等物理法，及强碱、强酸、抗氧化剂处理等化学法，但 菌产生的一类结构类似的强毒性次级代谢产物[2]， 这些理化方法不仅成本高、效率低，且部分方法还伴 广泛分布于 自然界中，主要侵染花生、玉米等粮油作 有毒性物质产生。随着科技的不断发展，微生物去 物，每年给全球造成巨大的经济损失。黄 曲霉毒素 毒法成为近年来的研究热点。微生物去毒是利用细 具有强肝毒性，低剂量可抑制动物免疫机能，使消化 菌、真菌等微生物及其代谢产物降解饲料、食品中污 系统紊乱[3]等，高剂量会诱导机体癌变、畸变甚至死 染的霉菌毒素 。生物去毒法对原料无污染、具有高 亡。现已分离鉴定出20多种黄曲霉毒素，其中B1、 度专一性、同时避免毒素重新产生，因此是一种高 B2、M1、M2、G1、G2这 6种 自然环境下较为常见， 效、安全的去毒方法_8]。大部分微生物去毒是通过 以B1(AFB1)毒性最强，也最为常见，1993年世界 分泌降解酶与毒素反应，达到解毒的作用。目前国 卫生组织癌症研究机构 (IARC)将 AFB1划定为 IA 内外已报道的降解AFT的真菌包括假蜜环菌 (Ar— 类致癌物l4]。尽管黄 曲霉素种类繁多，但是它们均 millariellatabescens)_9、糙皮侧耳 (PleurotusOS— 是二氢呋喃香豆素的衍生物，都含有氧杂萘邻酮(香 treatus)等食用真菌，树状 指孢 霉 (Dactylium 豆素)的致癌结构和二呋哺环的基本毒性结构[5]，因 dendroides)等孢霉属菌及黑 曲霉 (Aspergillusni 此，可利用香豆素初步替代黄 曲霉毒素进行解毒的 ger)等曲霉属菌[1。能降解AFT的细菌主要有类 研究。 棒状杆菌诺卡氏菌 (Nocardia∞r e fr Ps) 黄 曲霉毒素 自1960年在英国东南部农村暴发 DSM12676、红 串红球菌 (Rhodococcuserythropo 死亡的火鸡身上发现至今已有半个多世纪l6]。由于 lis)、橙色粘球菌 (Myxococcus lvus)、嗜麦芽窄食 霉菌环境适应力好、繁殖能力强，在适宜条件下便可