卵母细胞在微流控装置加载保护剂过程中的渗透行为模拟及损伤评估.pdf

第 l6卷第 1期 热 科 学 与 技 术 Vo1．16No．1 2017年 2月 JournalofThermalScienceandTechnology Feb．2O17 文章编号：1671—8097(2017)01—0008—05 DOI：10．13738／j．issn．1671—8097．2017．01．002 卵母细胞在微流控装置加载保护剂过程 中的 渗透行为模拟及损伤评估 周 新 丽， 邵 文 琪 ， 杨 云， 周 楠 峰 (上海理工大学 生物热科学研究所，上海 200093) 摘要 ：卵母细胞在冷冻保护剂加载过程中受到的渗透损伤和毒性损伤会影响细胞的存活率，针对这一情况， 通过软件模拟来了解卵母细胞在不同冷冻保护剂加载情况下的渗透行为，以寻求合适的加载方案使得 卵母 细胞所受的损伤最小 。利用 MLAB编程分别模拟 出卵母细胞在 四步法、一般线性法、凸型线性法以及 凹型线 性法加载冷冻保护剂的方案下的渗透行为；综合积累性渗透损伤AOD、积累性毒性损伤_r、归一化体积V／ 三项参数来评估卵母细胞受到的损伤。结果表明，当胞外冷冻保护剂为乙二醇时，采用凹型线性加载法加载 冷冻保护剂对卵母细胞造成 的损伤最小。 关键词 ：卵母细胞 ；渗透行为 中图分类号：R318．52 文献标识码：A 度 的骤变。但保护剂浓度的改变方案理论上有成 0 引 言 千上万种，怎样添加对细胞的损伤最小 ，可以通过 卵母细胞的低温保存技术是人类辅助生殖领 理论模拟的方法进行预测 。 域的重要工具 ，将为不能生育、想推迟生育的女性 本文采用 MLAB(CivilizedSoftwareInc．， 提供更多的生育机会D-23，所 以，临床上对卵母细 Bethesda，MD)L7软件编程，对卵母细胞在利用微 胞进行低温保存的需求不断增加。但玻璃化冷冻 流控装置加载低温保护剂过程中的渗透行为进行 所得到的冷冻卵母细胞 的复苏率 、受精率、胚胎率 了模拟，并提出了损伤评估的方法。以加载 乙二 及分娩率还是不高，相当一部分原因是低温保护 醇(EG)为例，首先 比较了传统四步加载和连续线 剂 (cryoprotectiveagents，CPA)给细胞带来 的渗 性加载，其次，比较 了不同加载时间的线性加载以 透损伤[3和毒性损伤[4]。传统上采用分步加载保 及不同线型的线性加载，模拟 出细胞体积变化情 护剂的方法来减少卵母细胞 的损伤 ，但该方法操 况以及细胞内保护剂浓度变化情况 ，最后 ，再通过 作步骤繁琐，需短时间内在显微镜下准确找到细 细胞归一化体积 、积累性渗透损伤AOD(accu— 胞 ，并完成细胞在溶液间的转移 。一方面，这要求 mulatedosmoticdamage，A0D)8【]、积 累性毒性 操作人员有很高的熟练度 ；另一方面，操作过程中 损伤 ．，值[g]这些参数来评估哪种加载法对细胞 既容易造成细胞的丢失 ，又会使细胞受到由保护 的渗透损伤和毒性损伤较小。 剂浓度突然变化而造成的体积骤变 ，且在高浓度 1 渗透行为模拟及损伤评估研究 低温保护剂中的暴露时间过长。 有研究者采用在微观尺度上控制或操纵复杂 1．1 数学模型 流体的微流控技术 (microfluidics)[3来进行保护 本文采用两参数模型来描述细胞在保护剂加 剂的添加和去除。通过微注射泵控制的保护剂和