培养液酸碱性对玫烟色拟青霉孢子萌发情况影响.docVIP

培养液酸碱性对玫烟色拟青霉孢子萌发情况的影响 　　摘 要：本文研究了培养液酸碱性对玫烟色拟青霉孢子萌发情况的影响，结果表明，不同pH值培养液下其孢子萌发情况不同；酸碱条件均对孢子萌发起促进作用；偏酸性条件下玫烟色拟青霉孢子萌发率最高，中性条件下最低；菌株YXS-515菌株的耐酸碱性最强 关键词：玫烟色拟青霉；酸碱性；分生孢子；萌发率 中图分类号：Q965.8 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20160932008 前言 昆虫病原真菌是自然界控制害虫种群的主要因素之一[1]。目前全世界已知的昆虫病原真菌约100属800多种，其中研究较多的主要有白僵菌（Beauveria Vuillemin）、绿僵菌（Metarhizium Sorokin）、蜡蚧轮植菌（Verticillium Lecanii）、莱氏野村菌（Nomuraea rileyi）汤普森被毛菌（Hirsutella thompsonii）、玫烟色拟青霉（Paecilomyces fumosoroseus）、粉拟青霉（paecilomyces farinosus）、虫霉（Entomophthora Fresenius）等[2]。玫烟色拟青霉是其中的一类重要虫生真菌，其地理分布广泛，昆虫寄主多样，是蚜虫、粉虱等重要蔬菜害虫的重要致病真菌。近年来，由于玫烟色拟青霉在粉虱和蚜虫的防治方面效果显著，人们开始渐渐关注玫烟色拟青霉。玫烟色拟青霉（Paecilomyces fumosoroseus）属半知菌亚门（Deuteromycotina）、丝饱纲（Hyphomycetes）、丝饱目（Hyphomycetales）、淡色饱科（Moniliaceae）、拟青霉属（Paecilomyces）。该菌地理分布广泛，昆虫寄主多样。据报道，玫烟色拟青霉对二斑叶螨的防治效果达到54.3%，对思茅虫、云尺蛾幼虫的致死率可达93.4%和100.0%，特别是对蚜虫、粉虱等刺吸式口器害虫和地下害虫防治效果非常显著[2] 1 材料与方法 1.1 供试菌株 玫烟色拟青霉诱变优势菌株 UV-506、YXS-509、YXS-515、UV-500、UV-504 1.2 培养基 0.1%酵母浸出物培养液（YEM）：1g酵母浸出物，1000ml蒸馏水 5%酵母浸出物培养基（YEM）：5g酵母浸出物，100ml蒸馏水 1.3 磷酸盐缓冲液的制备 1/15的Na2HPO4溶液：称取11.876g纯的Na2HPO42H2O溶于1L蒸馏水中 1/15的KH2PO4溶液：称取9.078g的KH2PO4溶于1L蒸馏水中 以上缓冲液均于121℃灭菌30min，备用 1.4 仪器与设备 光学显微镜 Motic XSP-201C，麦克奥迪实业有限公司 超净工作台 SW-CJ标准型洁净工作台，苏净集团苏州安泰空气技术有限公司 电子天平 Sartorius BS型，北京赛多利斯仪器系统有限公司 磁力搅拌器 IKARCT型，广州仪科实验室技术有限公司 灭菌锅 DSX-280B，北京阳光思特生物技术公司 移液枪（10ml，200ul，100ul，10ul，20ul各一支）Eppendorf，上海肯强仪器有限公司 酶标仪 戴尔台式电脑，美国DELL有限公司 Microsoft Excel 2010 中文版，用于统计和分析孢子出芽相关数据 1.5 供试菌株的培养 将供试菌株接于SDA平板培养基上，26℃恒温培养7d左右 1.6 孢子悬浮液的制备 超净工作台下，用无菌水将吐温-80稀释至无色，将SDA平板取出，用稀释后的吐温-80冲洗，将冲洗过后的菌液置于50ml的小烧杯中。25℃，1000rpm磁力搅拌30min 1.7 萌发中时（GT50）的测定 取1.5中制备的孢子悬浮液于酶标仪下，测定孢子浓度。根据测量数据，用0.1%酵母浸出物培养液将孢子悬浮液浓度调节至5×105 孢子/ml，并分装在三角瓶中。将三角瓶置于摇床，26℃恒温培养8h后每小时测定1次萌发率，共观察5次。用最小二乘法求菌株50%孢子萌发所需的时间（GT50） 1.8 pH对孢子萌发率的影响 将1.6中配置的缓冲液按比例混合，分别配置成pH=5.39、6.24、6.98、7.73、8.69 。5个不同pH的溶液各70mL并分装在150mL锥形瓶中 用配置好的缓冲液分别稀释5%的酵母浸出液培养液，将其稀释成5个不同pH的0.1%酵母浸出物培养液70mL，并分别装在5个150mL锥形瓶中 用上述培养液的每一种稀释3种1.5中配置的孢子悬浮液，这里选择孢子悬浮液的菌株类型为：UV-500、UV-504、