细菌的生长殖.ppt

接种 接种后灭菌接种环 （四）接种方法 　1.平板划线接种法： 目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 方法： 分区划线法：适用于含菌量较多的标本。 连续划线法：适用于含菌量较少的标本。 分区划线法 第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环 连续划线法 细菌的生长繁殖 一、细菌的生长曲线——将细菌接种到定量的液体培养基中，定时取样测定细胞数量，以培养时间为横座标，以菌数的对数为纵座标作图，得到的一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线。分为四期：迟缓期、对数生长期、稳定期、衰亡期 迟缓期 菌数不增加 但细胞内合成代谢旺盛 适应新环境，为分裂做准备 （1） 特点： 细胞大量繁殖； 浓度成几何级增加； 个体形态，染色性，生理特性典型。 （2）生产上 作为发酵的种子、实验材料 对数生长期又称指数期 稳定期 细菌增殖数与死亡数趋于平衡 菌数最高并能维持一段时间 在生产上采取补救措施，积累更多的代谢产物 衰亡期（decline phase） （1） 特点： 死亡速率大于生长速率； 菌体开始自溶； 细胞形态多样，染色性改变； 芽孢成熟,可作为菌种保藏材料。 （2）生产上： 掌握发酵时间 二、细菌的人工培养 根据细菌的生理需要和繁殖规律，用人工方法为细菌提供营养物质和适宜的环境条件，使细菌在短时间内大量繁殖，称为细菌的人工培养。 （一）培养基 培养基是人工配制的，适合细菌生长繁殖或产生代谢产物的营养基质。 培养基几乎是一切对微生物进行研究和利用工作的基础 任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素： 碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水 任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理； 常规高压蒸汽灭菌： 1.05kg/cm2,121.3℃15-30分钟；0.56kg/cm2,112.6℃15-30分钟 培养基制备的一般程序(扩展) 调配 溶化 矫正pH 过滤澄清 分装 灭菌 检定 培养基灭菌 ★ 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15分钟 ★ 含糖培养基：113 ℃灭菌15分钟 ★ 鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次 ★ 不耐高温的液体成分：滤过除菌 保存 1、选用和设计培养基的原则和方法（扩展知识） 目的明确 营养协调 理化条件适宜 经济节约 1）目的明确 根据不同的微生物的营养要求配制针对强的培养基。 培养化能自养型的氧化硫杆菌的培养基组成为： S 10g mgSO4.7H2O 0.5g （NH4）2SO4 0.4g FeSO4 0.01g H2PO4 4g CaCl2 0.25g H2O 1000ml 培养化能异养的大肠杆菌一种培养基是由下列化学成分组成： 葡萄糖 5g NH4H2PO4 1g NaCl 5g MgSO4.7H2O 0.2g K2HPO4 1g H2O 1000ml 常见的培养四大类微生物的培养基 细菌（牛肉膏蛋白胨培养基）： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g H2O 1000ml 放线菌（高氏1号） 淀粉 20g K2HPO4 0.5g NaCl 0.5g MgSO4.7H2O 0.5g KNO3 1g FeSO4 0.01g H2O 1000ml 酵母菌(麦芽汁培养基) 干麦芽粉加四倍水，在50℃--60℃保温糖化3-4小时，用碘液试验检查至糖化完全为止，调整糖液浓度为10。巴林，煮沸后，沙布过滤，调PH为6.0。 霉菌（查氏合成培养基） NaNO3 3g K2HPO4 1g KCl 0.5g MgSO4.7H2O 0.5gFeSO4 0.01g 蔗糖 30g H2O 1000ml 2）营养协调 　　培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好，营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需，浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用。 　　培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和代谢产物的形成和积累，其中碳氮比（C/N）的影响较大。 碳氮比指培养基中碳元素与氮元素的物质的量比值，有时也指培养基中还原糖与粗蛋白之比。 例如，在利用微生物发酵生产谷氨酸的过程中，培养基碳氮比为4/1时，菌体量繁殖，谷氨酸积累少；当培养基碳氮比为3/1时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量则大量增加。 3）理化条件适宜 pH 水活度 氧化还原电位 a. pH 培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型 微生物的生长繁殖或产生代谢产物。