过硫酸氢钾复合盐消毒作用实验研究.docVIP

过硫酸氢钾复合盐消毒作用实验研究 过硫酸氢钾复合盐是国内新近生产的一种非氯氧化消毒剂，其水溶液接近中性，溶解水后产生各种高能量、高活性的小分子的自由基、活性氧衍生物等过氧化氢的衍生物，能破坏微生物细胞膜的通透性屏障，使细胞内容物流失，丧失能量依赖性膜运输系统的功能，并且可与核酸中金属离子如钙、铁等结合，产生自由· OH 基，作用于DNA 的磷酸二酯键而导致其断裂［1］。对RNA 亦有类似的破坏作用［2］。过硫酸氢钾复合盐作为水处理消毒剂具有很强的氧化能力，可以杀灭水中微生物，去除污水中的有机物，其代谢产物仅使水中的K+ 、SO24+有少许增加，不会对人类和环境带来影响［3］。为观察验证其消毒效果，对过硫酸氢钾复合盐的消毒作用进行了实验研究。 1 ?材料与方法 1.1 材料 1.1.1过硫酸氢钾复合盐?白色颗粒结晶，以三合盐的形式组合，分子式为:2KHSO5-KHSO5-K5SO4，分子量为614.7，为一种无机化合物，浙江省上虞洁华化工有限公司产品，其有效成分含量约为70%-75%。消毒时浓度为10-160mg/L。 1.1.2供试菌种?金黄色葡萄球菌（ATCC6538）、绿脓杆菌（ATCC2027 ）、枯草杆菌黑色变种（ATCC9372）、大肠杆菌（ATCC8040）。以上菌种均购自中国菌种保藏中心，由黑龙江省佳木斯大学基础医学院微生物教研室保藏。 1.1.3?HBsAg阳性血清用ELISA法检测，滴度为1:4096，由黑龙江省佳木斯大学第一附属医院检验科提供。 1.1.4?培养基普通肉汤培养基?配方为［4］] 牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl5.0g，水1000ml，PH=7.4~7.6。改良沙氏肉汤培养基，参照文献［4］自配。 1.1.5 ?实验动物?黑龙江省佳木斯大学实验动物中心提供。 1.2 试验方法 1.2.1中和剂选择试验［5］?试验菌为大肠杆菌与金黄色葡萄球菌。中和试验设6个试验组： 消毒剂+ 菌悬液；消毒剂+菌悬液）+中和剂；中和剂+菌悬液；（ 消毒剂+ 中和剂）+ 菌悬液；磷酸盐缓冲液（PBS）+菌悬液；未接种菌的培养基对照。试验结果，当第6组不长菌，第3、4、5组组间菌数相差不超过10%，第1组不长菌或长菌数远少于第2组，第2组长菌数超过100cfu/ml 时，为所选中和剂浓度。 1.2.2 ?悬液定量杀菌试验?试验菌为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌与枯草杆菌黑色变种芽孢将0.5ml菌悬液与45ml消毒液混匀，作用至预定时间，取0.5ml菌药混合液，加入45ml中和剂中，混匀。中和作用5min，取该液0.5ml接种平皿，倾注普通营养琼脂并混匀。于37培养48h，计数菌落数，计算杀灭率。 1.2.3?乙肝病毒表面抗原破坏试验?用含5%小牛血清的ABS将纯化乙肝病毒表面抗原稀释成其含量为试剂灵敏度50000 倍，50ul 加入反应孔中，加入50ul消毒液使其终浓度分别达到40,80,160ml/L，作用不同时间。阴性对照为含5%小牛血清PBS。用ELISA法检测HBsAg抗原性，以试验组OD值（S）与阴性对照OD 值（N）的比值（S/N）2.1判为HBsSg灭活有效。 2 ?结果 2.1?中和剂试验 以含40mg/L过硫酸氢钾复合盐加大肠杆菌、金黄色葡萄球菌后作用5min后，加中和剂作用5min观察中和作用。所选中和剂为1%硫代硫酸钠。结果见表1。 表1?消毒剂中和试验结果 ? 组?别 试验菌 金黄色葡萄球菌 （cfu/ml） 大肠杆菌 (cfu/ml) （消毒剂+中和剂）+菌悬液 3 100 000 1 112 000 中和剂+菌悬液 3 100 000 1 120 000 （消毒剂+菌悬液）+中和剂 139 260 消毒剂+菌悬液 0 0 对照 3 160 000 1 200 000 注：试验温度为20，结果为3次平均值。 2.2 ?悬液定量消毒试验 10~40mg/L过硫酸氢钾复合盐对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的杀灭率均为100%，对白色念珠菌的杀灭率均大于99.50%。但未观察到对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭作用。结果表2。 表2?过硫酸氢钾对悬液中细菌的杀灭效果 试验菌株 过硫酸氢钾浓度（mg/L） 对照组平均菌数（cfu/ml） 试验组 残留菌落数（cfu/ml） 平均杀灭率?(%) 大肠杆菌 40 4.5×107 0 100.00 20 0 100.00 10 0 100.00 金黄色葡萄球菌 40 2.2×107 0 100.00 20 20 99.999 10 30 99.998 白色念珠菌 40 2.2×107 55 99.90 20 93 99.97 10 2000 99.58 枯草芽孢杆菌变种 40 5.3