常规病理组织处理.ppt

组织标本离体后，要经过固定、脱水、透明、浸蜡和包埋等一系列的后续处理。组织处理的每一个步骤都非常重要。 因为标本的取材，部位的选择等等，都或多或少地会影响到组织处理的程序、染色的效果以及最终的诊断是否合适 组织结构的保存、有效成分的保留，取决于组织处理所使用的试剂和各步骤处理的时间等因素。为病理诊断提供优质的切片需要技术人员在日常的工作中不断积累熟练的技巧和经验。 一.固定 病理标本的制作和组织处理都必须先进行固定。如果固定不佳，制片的其它程序将非常困难，可以说没有很好的固定就没有很好的HE染色，就会造成诊断困难，甚至误诊，这足以证明固定的重要性 概念：组织离体后，采用某些办法使其细胞内物质尽可能接近其生活状态时的形态结构和位置的过程。（应用各种方法使病理标本尽量保持其离体前状态的过程） 目的：防止组织细胞自溶和腐败，保持细胞内成分（蛋白质、脂肪、碳水化合物或酶类）与原有的结构与生活时相仿。 微小破碎组织，在包埋操作时易于识别操 作，组织处理前可浸泡在1%伊红液中5-10分钟。伊红的粉红色在组织处理时可以保留，但是在随后的切片染色中可以洗去不影响正常的染色。 2.AAF液：95％乙醇85ml，甲醛（浓）10ml，冰醋酸5ml。 特点：此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水。 其他还有很多固定液，不一一介绍，有些液体混合后使用比单独使用效果更佳，作用互补，真正达到固定的目的。 组织脱水不足的补救 组织脱水不足常影响后继的透明与浸蜡, 表现为含蜡组织块发软，制成蜡块后组织块与周边石蜡容易发生脱离，此种蜡块往往难以切出组织薄片或即使强行切出也会出现组织挤压、破碎，影响病理诊断。 图1组织脱水不足所制蜡块, 切片镜下观察, 组织挤压、破碎, 核染色不清 图2 补救处理后, 组织平整、无破碎, 核染色清晰 把蜡块放入60度石蜡溶液中,使组织周围石蜡完全溶解, (1)保持组织块内石蜡成份处于溶融状态。同时,在75度水浴槽内先后放入盛有30 ml丙酮的A、B 两组烧杯(50 ml容积),时间差约为5 min,预热丙酮。(2)待A丙酮完全沸时, 放入组织块, 此时丙酮内逐渐有白色糊状石蜡沉淀出现, 组织块有液泡冒出。(3)当B丙酮完全沸时, 迅速将组织块从A丙酮换入其中, 处理10 min,此时丙酮内石蜡沉淀明显减少, 组织块仅有少量或无液泡冒出。(4)取出组织块, 立即投入75度石蜡溶液中, 直至组织块无气泡冒出, 约15 min。(5)常规包埋、切片、HE 染色。 原理： 本法以沸丙酮为介质。其原理为: (1) 丙酮和石蜡不相溶，此特性保证了彼此单向置换，即以丙酮为溶液时，石蜡被置出；以石蜡为溶液时，丙酮被置出。(2)以75度作为脱蜡与浸蜡的适宜温度，远高于丙酮沸点(56-57)及石蜡溶点(58-60)，能使丙酮与石蜡有效而快速地进行单向置换。(3)丙酮作为一种快速脱水剂，目前主要用于快速石蜡切片的制备 ，适宜温度亦为75度。 浸蜡温度应与石蜡熔点想对应，有条件的话（第一道石蜡可用48-50度熔点的石蜡），第二、三道石蜡用56-58度熔点的石蜡，温箱温度不宜高于62度。尽量不要在蜡里带入二甲苯。 低熔点石蜡通常较柔软，高熔点石蜡通常比较坚硬，耐受切片。 六.包埋 包埋机一般由3个部分组成：自动流蜡器、冷台以及储备底座和组织包埋盒的热槽。 石蜡经过喷嘴自动流入大小合适的包埋底座。组织在包埋底座中排列方向和位置，加盖塑料包埋盒，形成一个带有组织的平行的蜡块。 注意： 当组织包埋时，组织的方向对证明或显示组织的形态是一个重要的问题。组织的定向或定位不应该对组织切片有影响。错误的定向可能会导致所需组织成分的破坏或错误的诊断。大部分组织是平埋的，组织周边的包埋介质将对组织起到固定保护作用。 以下组织需要特殊定向包埋：腔性结构如动脉、静脉、脉管需横切；皮肤、肠道、胆囊、膀胱和其它上皮类活检组织，应从底下开始切片，保证组织的上皮面最后切到，这样可以减少对上皮的挤压，损伤切片；肌肉活检：横向和长纵向切片；多块碎组织应一个接一个排列，保证组织结构在包埋时排列方向上的一致。 过夜标本处理实施 对许多科室来说，过夜处理是相对常用的一种处理模式。组织固定浸泡于10%福尔马林或AF液，梯度乙醇、二甲苯或二甲苯的替代物，以及石蜡浸透。使用自动组织处理机制定程序时应考虑影响处理程序的以下诸多因素：即实验室所需要的结束时间；使用的液体是否需要加热；是否启用加压，真空功能；组织标本数量的多少及体积的大小等 组织干燥处理： 组织处理的机器或设备发生故障时，导致组织在浸蜡之前发生干燥（干涸），组织可能会失去正常的形态，以下纠正处理的方法有助于帮助组织得到可