阻断孕鼠子宫动脉后宫内窘迫胎鼠海马.docVIP

阻断孕鼠子宫动脉后宫内窘迫胎鼠海马 　　[摘要] 目的 观察阻断孕鼠子宫动脉后宫内窘迫胎鼠海马组织内谷氨酸（Glu）浓度的变化。 方法 随机将72只SD孕鼠采用3×3析因设计方法[阻断子宫动脉的程度（3水平：轻度阻断、中度阻断、完全阻断）和阻断时间（3水平：5、10、15 min）]，分为9组（n=8），建立宫内窘迫的大鼠模型。全部胎儿宫内窘迫制模结束后，剖宫取出胎鼠，留取海马，采用高效液相色谱法检测受试胎鼠海马组织中Glu含量。 结果 阻断孕鼠子宫动脉后宫内窘迫可以诱发胎鼠海马组织Glu浓度升高，轻度阻断（5、10、15 min）分别为（50.20±7.67）、（54.67±7.52）、（65.40±7.61）μmol/gprot，中度阻断（5、10、15 min）分别为（69.17±12.08）、（90.53±18.95）、（121.84±22.62）μmol/gprot，完全阻断（5、10、15 min） 分别为（137.81±29.78）、（170.93±18.77）、（184.39±20.86）μmol/gprot；在相同阻断时间下，随阻断子宫动脉的程度加大，可增加受试胎鼠海马组织内Glu浓度（F=46.699、110.803、84.633，P 　　[Key words] Glutamate； Fetal intrauterine distress； High performance liquid chromatography； Hippocampus 胎儿宫内窘迫主要是由宫内胎儿的血供绝对或相对下降引起的，造成胎儿出生后学习和记忆等脑功能下降，但其具体的发病机制不明，可能与中枢神经谷氨酸（Glu）信息传递系统出现功能异常有一定关系。研究者的首要疑问是，胎儿宫内窘迫后的缺血缺氧强应激诱发的神经组织内Glu浓度升高是否可以通过制作动物模型、以动物实验来得到实际验证？不同程度和时间阻断子宫动脉会对胎鼠海马组织中的Glu含量是否有不同的影响？为此设计本实验，研究不同程度和时间阻断子宫动脉的宫内窘迫模型的制作和其诱发的缺血缺氧强应激对胎鼠海马组织内Glu含量的影响 1 材料与方法 1.1 实验动物 选择无特定病源体级（SPF）SD大鼠，鼠龄24周，体重为275～300 g，雌雄各80只，由内蒙古医科大学动物实验部提供（动物合格批准文号：内医动-第013号）。雌雄大鼠合笼饲养之后，研究者需要每天使用棉签擦拭雌鼠阴道，进行阴道精液涂片检测，若为阳性则将该日记录为雌鼠受孕的第1天，并且换用高营养的饲料进行喂养。此后，实验人员应每日观察该雌鼠的腹部是否有膨隆的怀孕表现，如果连续10 d均无子宫膨隆现象，则可以认定为该雌鼠受孕过程失败。本实验实施方案经内蒙古医科大学伦理审查委员会和内蒙古医科大学附属医院伦理审查委员会审查批准，并且全部操作均按照动物实验相关经典指南严格执行。所有实验都严格遵循标准的动物实验原则，即随机、对照、双盲的实验原则 1.2 方法 1.2.1 实验动物分组 选取72只受孕18 d大鼠作为试验对象，采用3×3析因设计：阻断子宫动脉的程度（3水平：轻微阻断、中度阻断、完全阻断）和阻断时间（3水平：5、10、15 min），随机分为9组（n=8） 1.2.2 大鼠子宫动脉夹闭模型的制作及取材 选择符合实验要求的SD大鼠雌、雄合笼饲养受孕。受孕18 d时按照参考文献[1]制作大鼠子宫动脉夹闭模型（宫内窘迫大鼠模型），方法为：充分暴露大鼠子宫动脉后，用硅酮血管阻断带紧绕动脉，实验开始时以一把血管钳夹血管阻断带交汇处为轻微阻断；两把血管钳并列夹为中度阻断；完全阻断动脉血流为完全阻断。子宫动脉夹闭模型制模结束后，剖宫取出胎鼠，麻醉下断头取脑、分离获取胎鼠海马，组织进行称重后，加甲醇-水配制的离心液1 mL，在低温下匀浆处理，继而取出一部分的匀浆液置于4℃ ，以12 000 r/min的条件，进行15 min离心处理，最后取出上清液，再经滤膜过滤处理之后，将其放置在-80℃冰箱之内保存，待测Glu具体含量 1.2.3 高效液相色谱法（HPLC）检测Glu在胎鼠海马中的含量[2] 1.2.3.1 检测样品 处理好的胎鼠右侧海马匀浆上清液 1.2.3.2 试剂 Glu标准品（Sigma公司、L-Glutamic acid ReagentPlusR，批号2013000312），邻苯二甲醛（上海碧云天生物有限公司，批号201200431），β-巯基乙醇（Gibco公司，2-Mercaptoethanol-1000X，批号20140000545），色谱级甲醇（上海碧云天生物有限公司，批号201200652） 1.2.3.3 仪器及色谱条件 低温高速离心机（Centrif