拟南芥抗菌核病突变体的筛选.PDF

2006年 12 月 中国油料作物学报 2006, 28 (4) : 388—39 1 Ch ine se jou rnal of o il crop science s 拟南芥抗菌核病突变体的筛选 1, 2 2 1, 2 2 高荣村 , 董彩华 , 胡胜武 , 刘胜毅 ( 1. 西北农林科技大学农学院 , 陕西 杨凌 7 12 100; 2. 中国农业科学院油料作物研究所 ,农业部油料作物遗传改良重点实验室和基因组与分子生物学研究室 , 湖北 武汉 430062) 摘要 :为筛选模式植物拟南芥抗菌核病基因源 ,建立了两种抗性鉴定筛选方法 :菌丝体直接接种离体叶法和菌 核病毒素草酸 - 病菌接种两步法 。后者是先用 2mmo l/L 草酸在 M S培养基上筛选 ,存活的植株经 PCR 验证 , 阳性 植株移栽培养 15d 后 ,再用菌丝体接种鉴定 。采用第一种方法筛选了 5 000 株突变体 ,发现了抗感差异明显的个 体 ;采用第二种方法筛选了 46 600株 ,发现 2株对菌核病高抗的功能缺失型突变体 。野生型对照在接种后 12h 即 出现病斑 ,而突变体在 36h才出现 ,其病斑大小仅为对照的六分之一 。 关键词 : 拟南芥 ; 突变体 ; 菌核病 ; 抗病性 ; 功能缺失型 中图分类号 : S435. 654　文献标志码 : A 　 文章编号 : 1007—9084 (2006) 04 —0388—04 ( ) 　　菌核病是由核盘菌 S clerotin ia sclerotiorum 侵 变 ,然而对于显性致死的突变体则很难保留后代 。 染所造成的一种世界性病害 ,可以感染 75个科 , 450 在此基础上 ,左建儒等 [ 9 ] 用基于雌激素受体的化学 多种植物种或亚种 [ 1 ] , 该病 是油菜 最严重 的病 诱导激活标签载体系统转化拟南芥 ,创造突变体 。 害 [ 2 ] 。对作物抗菌核病鉴定筛选方法 、抗源筛选和 这些突变除由 T - DNA 插入引起的功能丧失外 ,还 转基因抗病品种的培育已有较多的研究报道 [ 2 ～6 ] 。 有由此载体化学诱导表达系统控制的功能获得突 在抗病鉴定方法方面已形成了适用于不同抗性鉴定 变 ,为条件功能获得型突变 ,可以在任一给定的发育 目的的方法 [ 2 ～6 ] ,其中菌核病毒素草酸法可对油菜 时期诱导表达 。至今尚无抗菌核病拟南芥突变体的 细胞 、组织和植株进行抗性鉴定筛选 [ 4 ～6 ] 。在抗源 报道 ,为了利用模式植物拟南芥突变体库资源发掘 筛选方面 ,尽管经过几十年努力 ,筛选了数千份品种 抗菌核病材料或基因 ,本研究在研究筛选抗菌核病 资源 ,得到了数份高耐菌核病的材料 ,但在所有菌核 拟南芥突变体方法的基础上 ,筛选了通过化学诱导 病寄主作物中 , 目前未发现免疫类型 [ 3, 4 ] ,也没有得 激活标签系统创造的 51 660株拟南芥突变体 。 到满足研究和育种需求的抗源 ,使遗传研究和抗病 育种仍面临很多困难 。 1　材料与方法 拟南芥是研究植物与病原物相互作用的模式植 1. 1　实验材料 物 ,具有生长周期短 、植株小 、核基因组小等优点 ,且 试验用拟南芥突变体由中国科学院遗传与发育 基因组全序列已于 2000年 12 月测定完成 。目前已