干旱胁迫对柴胡中皂苷合成关键酶基因表达及皂苷含量的影响.pdf

2016年2月I第41卷第4期 c中 曼． 纛 Vo1．41，No．4lFeburary，2016 干旱胁迫对柴胡中皂苷合成关键酶基因表达及 皂苷含量 的影响 张宇 ，周 自云 ，夏鹏国 ，梁t乐-~ ,P’ ，刘书礼。，刘之 良 (1．西北农林科技大学 生命科学学院，陕西杨凌 712100； 2．浙江理工大学 生命科学学院，浙江杭州310018；3．四川逢春制药有限公司，四川 中江610081) [摘要] 为了探究干旱胁迫对柴胡皂苷合成关键酶基因表达和皂苷含量的影响，以期从终产物，基因水平揭示柴胡皂苷合成 对环境变化的响应。该研究以定植5个月的柴胡苗为研究材料，通过添加聚乙二醇(PEG)模拟干旱环境 ，利用 HPLC测定不 同胁迫程度下，柴胡根中皂苷a和d含量的变化，同时以flltubulin为内参基因，采用荧光实时定量PCR(RT．qPCR)分析皂苷合 成途径中4个关键酶3一羟基．3一甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)，异戊烯基焦磷酸异构酶(IPPI)，法尼基焦磷酸合酶 (FPS)和JB一香树素合成酶(卢．As)基因的表达。通过研究发现，干旱胁迫处理显著提高了柴胡中皂苷的含量，且当PEG为 10％ 时，柴胡皂苷a和d质量分数最高，分别达到0．648％，0．781％；同时，各基 因表达量结果显示，4个关键酶基因的表达均呈现 不同程度的上调 ，其中 ，S和 ．AS上调极显著(P0．O1)；此外，相关性分析表明，HMGR，P，，FPS，3／．AS的表达量和皂苷含 量间存在显著正相关关系。因此，干旱胁迫下，柴胡通过调节皂苷合成关键酶基因的表达，来调节次生代谢物皂苷的合成，从 而对逆境做出响应。 [关键字】 柴胡；干旱胁迫；皂苷；基因表达 Expressionofkeyenzymegenesandcontentofsaikosaponin in saikosaponinbiosynthesisunderdroughtstressinBupleurum chinense ZHANG Yu ，ZHOUZi—yun ，XIAPeng．guo ，LIANGZong．SUO， ，LIU Shu．1i。 LIU Zhi-liang3 ， (1．CollegeofLifeScience，NorthwestAFUnivenity，Yangling712100，China； 2．Collegeof Sceince，ZhejiangSci—TechUniversity，Hangzhou310018，China； 3．FengchunPhamn~eutical，Zhon~iang610081，China) [Abstract] Toresearchtheexpressionofkeyenzymesinsaikosaponinbiosynthesisandthecontentofsaikosaponinunderthedrought stress，thestudyfocusedonthegene-levelandtheendproductresponsestoenvironmentalchnage．TakingthefivemonthsofBupleu· FIMnchinenseasroseal~hmaterials，thecontentsofsaikosaponinA nadsaikosaponinD underdifferentstresslevelsweremeasuredby HPLC．Thedrouhgtwassimulatedbypolyethyleneglyco1．Thereal-timefluorescencequantitativePCRwasusedtonaalyzetheexpres- sionoffourkeyenzymesgenesHMGR，IPPI，FPS，卢一ASandtheexpressionof卢一tubulinWas setasare