灰盖鬼伞过氧化物酶功能表达及部分酶学特性.PDFVIP

Ｒesearch Paper 研究报告 微生物学报 A cta M icrobiolog ica Sinica 55 (3 ) :32 1 － 329 ; 4 March 20 15 ISSN 000 1 － 6209 ; CN 11 － 1995 / Q http :/ / journals． im ． ac ． cn / actamicrocn doi : 10. 13343 / j ． cnki． wsxb ． 20 140260 灰盖鬼伞过氧 化物酶功能表达及部分酶学特性 1 1 2 1 1 1 1 1 ， ， ， ， ， ， ， 董冰雪 牛秋红 张伟 耿三春 李鹏 远万里 贡一 峰 梁珂 维 1 2 ， ， ， 47306 1 南 阳师 范 学院 生命 科学与技术学院 校 医院 河南 南 阳 : 【 】 。 【 】 DNAworks 3. 1 、 摘要 目的 旨在用 毕 赤酵 母 高效表达 灰盖 鬼伞 过 氧 化 物 酶 方 法 借 助 软 件 设 计 优 化 ， 、 ， 引物 用自 己构建的基因合成 定 点突变平 台合成 了毕 赤酵 母 密 码 子 偏 好 性 的灰 盖 鬼伞 过 氧 化 物 酶 基因 测 pPICZ A ， GS115 ， 序 后 构建在表达 载 体 α 上 整合 于 巴斯 德 毕 赤酵 母 染 色 体 来自 酿 酒 酵 母 的 α 因子 作为信 号 肽序列 指 导重 组 蛋白 的分泌表达 。从 82 个 PCＲ 检 测 为 阳性 的酵 母 转化 子 中筛选 出 6 株 高 Zeocin 抗 性 的菌 ， CIP / GS115。 【 】 ABTS ，CIP / GS115 进行表达 选表达 酶 活性最 高 的作为实验菌株 命 名 为 结 果 以 为底 物 时 4 487. 5 U / mL ， 在 甲醇诱 导第 天 酶 活最 高达 到 是 目前 摇瓶 培养 诱 导 表达 灰 盖 鬼伞 过 氧 化 物 酶 活 性 最 高 报 。 25 ℃ ，45 ℃ 6 1. 5 % ， 40 ℃ ， 道 纯化 后 的酶最适 反应温 度 为 酶 反应速 度是最 适温 度时 的 在低 于 时 比较 稳 定 超 45 ℃ 。 pH 5. 0 ， pH 4 . 5 －