mptp诱导的帕金森病小鼠模型黑质脑组织dna甲基化研究_胡雅岑.pdfVIP

Research Papers 研究报告 生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biophysics 2015, 42(3): 277~285 MPTP 诱导的帕金森病小鼠模型黑质 脑组织DNA 甲基化研究* 1) 2) 2,3) 2) 2) 1) 2) 胡雅岑 徐 倩 郭纪峰 艾三喜 宋承远 孙启英 翁 翎 1) 2,3) 2,3) 2,3) 2,3,4)** 周 琳 江 泓 沈 璐 严新翔 唐北沙 1) 2) ( 中南大学湘雅医院老年病学神经内科，长沙410008 ； 中南大学湘雅医院神经内科，长沙410008 ； 3) 4) 神经退行性疾病湖南省重点实验室，长沙410008 ； 中南大学医学遗传学国家重点实验室，长沙410078) 摘要 为研究DNA 甲基化在帕金森病发病机制中的作用，本研究用环境毒素1- 甲基-4- 苯基-1, 2, 3, 6- 四氢吡啶(MPTP)连 续腹腔给药诱导小鼠帕金森病(Parkisons disease ，PD)模型，应用ELISA 检测小鼠黑质脑组织总体甲基化水平，应用实时荧 光定量PCR 方法检测DNA 甲基转移酶表达水平，探讨MPTP 诱导的小鼠PD 模型黑质部位是否存在DNA 甲基化异常．进 一步应用甲基化DNA 免疫共沉淀结合DNA 甲基化芯片方法，构建MPTP 诱导的小鼠PD 模型黑质脑组织DNA 甲基化谱， 并寻找DNA 甲基化修饰异常的PD 相关基因对其进行验证．结果表明，模型组小鼠黑质脑组织DNA 总体甲基化水平较对照 组显著降低，Dnmt1 的表达水平显著增高．利用DNA 甲基化芯片在全基因组内筛选出甲基化差异修饰位点共48 个，涉及 44 个基因，这些甲基化差异基因参与信号转导、分子转运、转录调控、发育、细胞分化、凋亡调控、氧化应激、蛋白质降 解等生物学过程．在甲基化差异修饰基因中，对Uchl1 基因及Arih2 基因进行了甲基化水平以及表达水平的验证．结果表明， 模型组小鼠黑质脑组织Uchl1 启动子区域甲基化水平较对照组增高，mRNA 及蛋白质表达水平降低，Arih2 启动子区域甲基 化水平较对照组降低，mRNA 及蛋白质表达水平增高．实验结果进一步证实，DNA 甲基化修饰异常在帕金森病发病机制中 有重要作用，环境因素(如MPTP)可以通过改变DNA 甲基化修饰参与帕金森病的发生发展． 关键词 帕金森病，DNA 甲基化，总体甲基化，DNA 甲基转移酶，泛素羧基末端水解酶1 学科分类号 Q75 ，R74 DOI: 10.16476/j.pibb.2014.0120 [4] 帕金森病(Parkisons disease ，PD) 是一种常见 外周血中SAM 相对含量下降 ．PD 相关基因甲基 的神经退行性疾病，在中国65 岁以上的老年人中 化研究发现，PD 患者黑质密部细胞中的TNF-α 启 患病率约为1%～2% ，且随着年龄增长有增加的趋 动子甲基化水平降低，SNCA 内含子1 甲基化水平 [1] [5] 势 ．PD 的发病机制十分复杂，目前认为与遗传 降低 ，提示低甲