第二章之种子培养.ppt

种子扩大培养概念： 将保存在砂土管、冷凉干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过摇瓶及种子罐逐级扩大培养，获得一定数量和质量的纯种过程。 从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器接种种子罐 从种子罐接种到发酵罐 生产车间种子制备工艺可控参数: 3.生长更慢的菌种 链霉素生产菌种灰色链霉菌，一般采用三级种子罐扩大培养。 在小型发酵罐(5—30L)进行试验时，也有采用直接孢子或菌丝体接入罐中发酵，称一级发酵。 嗜碱性芽孢杆菌生产碱性蛋白酶，12小时最好。 影响种子质量的因素 种子质量的判断 种子质量的控制 大接种量： 可以缩短发酵罐中菌丝繁殖到达高峰的时间，使产物的形成提前，且生产菌迅速繁殖，可减少杂菌生长机会。 原因：?? (a、种子量多 b、种子液含大量水解酶类，利于利用基质) 接种量过多： 往往使菌丝生长过快、培养液粘度增加，造成溶解氧不足，而影响产物的合成。 嗜碱性芽孢杆菌生产碱性蛋白酶： 1％接种量产酶活力最高，超过4％酶产量明显下降。 接种量过小： 除了延长发酵周期外，往往还会引起其他不正常情况。 例如：在头孢菌素生产中，由于接种量过小，会产生大量菌丝团，而使产量降低， 但有的抗生素如制霉菌素，用1％接种量比用10％接种量的效果好，而0.1％接种量与1％的效果相似。 近年来，生产上多以加大种子量及采用丰富培养基作为获得高产的措施。 双种法：有的产品采用二只种子罐接一只发酵罐，如卡那霉素生产中采用双种比单种的发酵单位提高8％，而且达到产量高峰的时间提前。 倒种法：即以适宜的发酵液倒出适量，给另一发酵罐作种子．例如链霉素发酵中，使用倒种法比单种的发酵单位提高12％。而四环素发酵采用双种效果并不显著。 第二节 种子质量的控制 * * 微生物菌种的扩大培养 李尊华 2009. 9 第一节 种子制备工艺 实验室准备阶段 生产车间阶段 放罐，后处理 产品 一级种子发酵罐 二级种子发酵罐 种子质量的优劣对发酵生产起关键作用。其生产方法与条件随不同的生产品种和菌种种类而异。 发酵罐(几十或几百立方米) 按10%接种量 种子液(几或几十立方米) 由实验室制备到车间生产 的过程 作为种子的要求： 1) 菌种活力强，移种后能迅速生长，迟缓期短 2) 生理性状稳定 3) 菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求 4) 无杂菌污染 5) 保持稳定的生产能力 一、 实验室种子制备 接入斜面/平板，培养成熟后，挑选孢子，再一次接入斜面/平板，进行活化。(两次转接) A、砂土管或冷冻干燥管菌种活化 可采用固体培养基培养孢子，直接作为种子罐的种子。 举例:产黄青霉菌，采用大米或小米为固体培养基，装入摇瓶、灭菌，耍注意控制米粒含水量，使米粒不粘不散。接入孢子，25-28℃培养14d。培养结束，将孢子瓶于真空下抽去水分，使含水量10％以下，冰箱保存备用。 B、产孢子能力强的及孢子发芽、生长繁殖快的菌种 可以用摇瓶液体培养法，孢子接入液体培养基，振荡培养，获得菌丝体，作为种子。 例如：灰色链霉菌、卡那链霉菌。 C、产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种 生产上一般采用斜面营养细胞保藏法。 斜面菌种于32℃，培养18-24 h，即可移入250mL摇瓶液体培养基，32 ℃培养12 h，即可作种子罐种子。 例如：谷氨酸棒状杆菌。 D、不产孢子的细菌 一般保存在麦芽汁琼脂培养基或MYPG培养基的斜面上，4℃冰箱保存.每年移种3-4次。 斜面菌种→接入含10mL麦芽汁试管→25-27℃培养2-3d→扩大至三角瓶→25℃培养2d→移至含5-10L麦芽汁的罐→15-20℃培养3-5d→含100L麦芽汁的发酵罐。 E、生产啤酒的酵母菌 MYPG培养基：3g麦芽浸出物，3g酵母浸出物，5g蛋白胨, 10g葡萄糖,20g琼脂,1L水。 二、生产车间种子制备 采用易被菌利用的成分，如葡萄糖、玉米桨、磷酸盐等，同时还需供给足够的无菌空气并不断搅拌，使菌丝体在培养液中均匀分布，获得相同的培养条件。 种子罐培养原则： 摇瓶菌丝体种子： 种子罐之间或发酵罐间的移种： 接种方法： 可在火焰保护下接入种子罐或采用压差法接入。 主要采用压差法，由种子接种管道进行移种，移种过程中要防止接受罐表压降至零. Why? 种子罐 种子罐 种子罐级数 种龄 接种量 A 种子罐级数的确定 种子