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兔子糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)酶联免疫分析
兔子糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
产品编号:CSB-E07011Rb
检测范围: ng/ml -1000 ng/ml
最低检测限: ng/ml
特异性:本试剂盒可同时检测天然或重组的GHbA1c,且与其他相关蛋白无交叉反应。
有效期:6个月
预期应用:ELISA法定量测定血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中GHbA1c含量。
说明
1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
概述
实验原理
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗GHbA1c抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗GHbA1c抗体、HRP标记的,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的GHbA1c呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制
酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液?(HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
需要而未提供的试剂和器材
标准规格酶标仪
高速离心机
电热恒温培养箱
干净的试管和Eppendof管
系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等
标本的采集及保存
血清:全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
细胞培养物上清或其它生物标本:1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则:
首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量,确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内,检测的结果才是准确的。稀释的过程中,应做好详细的记录。最后计算浓度时,稀释了“N”倍,标本的浓度应再乘以“N”。
标准品的稀释原则:2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为00 ng/ml,做系列倍比稀释后,分别稀释 ng/ml,500 ng/ml,250 ng/ml,125 ng/ml,62.5 ng/ml,31.2 ng/ml,15.6 ng/ml,样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml,临用前15分钟内配制。
如配制0 ng/ml标准品:取0.5ml(不要少于0.5ml)00 ng/ml的上述标准品加入含0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
生物素标记抗体的稀释原则:
临用前以生物素标记抗体稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素标记抗体加990μl生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则:
临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根过氧化物酶标记亲和素加990μl辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液?的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
加样:分别设空白孔、标准孔
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