病理切片技术-学术报告.ppt

病理切片技术 目录 一、取材 二、固定 三、脱水 四、透明 五、浸蜡 六、包埋 七、切片 八、染色 一、取材 取材是制作切片程序中的首要步骤，取材不当，将直接影响病理诊断和科研工作的效果。组织标本的选用非常重要，不能随意的切取组织来制作组织切片，否则病理检验的结果是不会令人满意的。 取材工具：取材刀具必须锋利。切取标本不应该挤压和揉擦，以免损害组织造成人为组织变化，给诊断带来困难或导致错诊，漏诊。 标本的选取：应选择病变或可疑病变的组织。必要时选取病变与正常组织交界处。组织宜小不宜大，以不超过24x24mm2为佳，厚度以3—5mm为度，过大过厚会影响对标本的固定，另方面也影响切片的制作。特殊目的者应属例外。 二、固定 在组织病理学中，不管是组织切片乃至电镜还是大体标本的保存，都必须进行及时的适当的和有效的固定。组织只有经过固定，才能完成随后的一系列的制作，直至切片的最后完成。 1.固定的作用 固定的作用，从组织学的角度其简单的定义是：保持细胞、组织的固有形态和结构，使之尽量保持细胞、组织的固有形态和结构。 从免疫组化技术的角度，使细胞内蛋白质凝固，尽量减少或终止外源性酶和内源性酶的反应；防止细胞的自溶，以免使抗原扩散至组织间质；保持组织的固有形态和结构；保持组织或细胞的抗原性。 2.固定的目的 能防止细菌的腐蚀和组织的自溶。 保存细胞固有的物质，能凝固或沉淀细胞内或组织液，糖原等，使细胞或组织基本上保持与生活时的物质一样。 使组织硬化，便于切块。 对某些具有传染性的标本，能防止疾病的扩散。 保存好大体标本。 可增强染色的作用。 3.固定的注意事项 组织固定越新鲜越好 组织固定，组织块不宜过大 对不同类型的组织应适当合理地选择固定液 组织固定，时间不宜太短，也不宜太长 固定液的量要充分 特殊病例或特殊物质应选择特殊的固定液 组织的第二次固定或后固定 4.固定液的使用 根据Bencroft的分类法，可分为四种类型： 醛类：甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。 氧化剂类：四氧化锇，高锰酸钾，重铬酸钾等。 蛋白变性类：甲醇，乙醇，醋酸等。 其他：氯化汞，苦味酸等。上述四种类型的固定剂，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技术方面中用到。 冲洗 组织经过固定后，脱水之前应进行冲洗，将组织内的固定液洗干净，否则残留组织内的固定液有碍制片和染色，而有些固定液则可在组织中继续起到脆化组织的作用，以至于损坏组织，给制片工作带来不利。在冲洗时，冲洗剂的选择应依固定液的种类和性质而有所不同。 冲洗时应注意以下事项： 水溶性的固定剂：需用流水冲洗。 酒精溶剂的固定剂：应用同浓度的酒精浸洗。 含苦味酸的固定剂：（苦味酸与甲醛混合液除外），须用70％酒精浸洗。 含有升汞固定剂：水或酒精中加碘以洗去组织内汞的沉淀。 含有铬酸的固定剂：冲洗时置于暗处，以免产生沉淀或使组织硬化而影响制片。 三、脱水 脱水就是用脱水剂完全除去组织内的水分，为下一步透明及浸蜡创造条件。此外，脱水还可以使组织再次发生一定的硬化，脱水剂必须是与水在任何比例下均能混合的液体。 1.常用的脱水剂 酒精 （常用） 丙酮(Acetone) 正丁醇(γ-Buty alcohol) 二氧乙环(Dioxan) 2.组织的摇震 为加快脱水进程可将标本放入各级酒精内借助机器或手工震摇，还可以加温促进脱水。即将标本装在塞紧的玻璃瓶置于包埋箱或温箱内，因液体受热产生的正压可增加溶液的对流。但热酒精会使组织过硬，并有爆裂危险，除急诊外，最好不用此方法。 四、透明 目的是使石蜡渗透到组织中去，达到包埋的支持作用。 将组织投入可以同酒精又能同石蜡相混合的媒剂 中，组织中的酒精就被该媒剂取代，待酒精完全被该媒剂完全取代后，组织即成透明状态 透明后就可以将组织浸入溶解的石蜡进行浸蜡 透明剂 二甲苯：能与酒精，丙酮相混合，又是石蜡的溶剂。 对组织的收缩性强，作用迅速，组织在二 甲苯中时间不宜过长 。(常用) 氯 仿：作用缓和 ，不易呈现透明现象 香柏油：处理细柔组织的最佳透明剂 。 五、浸蜡 组织经媒剂的透明作用之后，移入熔化的石蜡内浸渍，石蜡逐渐浸入组织间隙，取代透明剂，这一程序就叫浸蜡。 石蜡的质量和熔度与切片质量密切相关 。 为了增加石蜡的韧性，可在石蜡中加入一些混合剂，常用蜂蜡，硬脂酸，松香等。 六、包埋 包埋，就是将已经经过固定，脱水，透明，浸蜡的组织块从最后的蜡浴取出置入充满熔融石蜡的包埋框内，包埋成块，使组织和包埋剂相熔一体并迅速冷却，这个程序称为包埋。包埋剂凝固后，进一步加强了组织的硬度和韧度而便于进行切片。 1.石蜡包埋法 包埋的方法有自动包埋机包埋