轻工业微生物实验指导书.docVIP

实验一 培养基的制备与灭菌技术 一、试验原理 马铃薯中含有淀粉、蛋白质、脂类及多种维生素经煮沸后可把这些营养成分从中溶出以供酵母和霉菌生长需要，加入葡萄糖或蔗糖以补充微生物所需的碳源。此培养基为半合成培养基。 二、实验目的： 1、掌握培养基的制备方法， 2、学会高压蒸汽灭菌技术。 三、实验材料和仪器： 1、马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂。 2、烧杯、漏斗、试管、三角瓶、量筒、玻璃棒、纱布、棉花、细绳、牛皮纸、试管架、培养皿。 3、手提式高压蒸汽灭菌锅、天平、电炉。 四、实验方法与步骤： （1）选无芽、无腐烂的马铃薯、洗净、削皮、称40g切碎加水200ml,放入1000ml烧杯中煮沸0.5hr、冷却用纱布过滤去渣。 （2）在清液中加入4g葡萄糖溶解补水至200ml，此时到入一试管10ml。余下溶液加3.8g琼脂加热熔化。 （3）试管分装：取玻璃漏斗装在漏斗架上，漏斗下连一橡胶管，与玻璃管嘴相接，橡皮管上夹一弹簧夹，培养基倒入漏斗，通过弹簧夹控制培养基的流量。 （4）余下的培养基分装在两个250ml的三角瓶中。 （5）高压蒸汽灭菌：把溶解完的培养基用棉塞塞上并用牛皮纸把棉花包住，在121℃，0.1Mpa下灭菌20min即可，灭菌时要注意放净阀气。取出灭菌物品时一定要等到压力降到零时打开灭菌锅盖。 （6）斜面摆放：将分装灭菌后的琼脂培养基试管置于水平放置的试管上，凝固后即成斜面。 （7）培养皿培养基的倾倒：先用酒精棉球擦拭桌面及双手,在靠近酒精灯火焰的上方把冷却到45℃左右的培养基倒入培养皿内，每只倒入15ml左右。注意：温度太低培养基会凝固。 五、思考题： 1．培养基配制好后为什么要灭菌？ 2．蒸汽灭菌应注意几个问题？为什么？ 实验二 微生物接种和无菌操作技术 一、实验目的 1、了解无菌操作在微生物接种过程中的重要性，掌握无菌操作的基本环节。 2、掌握几种常用微生物的接种方法，为微生物的形态观察作准备。 二、实验材料 1、菌种 （1）细菌 大肠杆菌（Escherichia coli）））） 图1－3镜台测微尺 目镜测微尺是放在目镜内的一种标尺，它有固定式和移动式两种类趔。固定式目镜测微尺为一块圆形玻璃片，直径为20～21mm，如图1－4所示。在它的上面刻有各种形式的标尺，有为直线式的（图1一4A），有为网式的（图1—4B）通常用以测量长度的标尺为直线式的，一般为5mm，分成5大格，每一大格分成10小格，共计50小格。也有用同样长度分为100小格的。网式目镜测微尺主要用以计算数目和测量物体的面积。在它上面刻有方格 的网状标尺。方格的大小和数目各有不同，有25、36和49格，也有的一个正方形大格中划分100个方格，在中央的一个方格中再划分25个小方格。 图1－4目镜测微尺 A.直线式 B.网式 C.移动式（外形） D.移动式（内部） 移动式目镜测微尺基本上和直线式目镜测微尺相似，所不同的是除了泣种固定的标尺外，还有可以移动位置的指示线。它装在一个特别的目镜中．右边由一个能旋转的小轮控制着，轮上有刻度，分成100格，该轮每旋转一圈，目镜内能移动的指示线就从标尺一端向另一端移动－格。 显微测量时，先用镜台测微尺标定目镜测微尺每小格代表的长度，然后才能用目镜微尺来测量细胞的长度。 二、实验目的： 1、学会测微尺的使用和计算方法。 2、掌握酵母菌细胞体积的测定方法 三、实验材料和仪器： 1．菌种 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）上次实验的液体培养物 2．盖玻片、载玻片、显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺、酒精灯、生理盐水、吸水纸。 3．擦镜纸、滤纸条、镊子、无菌吸管、酒精棉球。 四、实验方法与步骤 测微尺的使用操作 1、卸下目镜的上透镜．将目镜测微尺有刻度一面向下装在回镜镜面上，再旋上目镜上的透镜。 2、将镜台测微尺有刻度的一面朝上放在载物台上夹好，使测微尺刻度位于视野中央。调焦至能看清镜台测微尺的刻度。 3、小心移动镜台测微尺和目镜测微尺（如目镜测微尺刻度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦），使两尺左边的“0”点直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重复的直线（图1－5）。 4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格的长度等于多少um 图l—5 目镜测微尺的标定 上，目镜测微尺；下，镜台测微尺 例如，图1－5中，在低倍镜下所标定的目镜测微尺的全长（50格），等于镜台测微尺70 格，则目镜测微尺每小格代表的长度则为：