遗传学实验― 微生物实验.pdfVIP

迎鱼上望卫TAS(Beijing)3(5);35-391981 遗 传 学 实 验 — 微 生 物 实 验 复旦大学生物系 十（一）大肠杆菌营养缺陷型菌株的筛选 一（） 物（理因素诱变） 实验原理 ．(6)2N基本液体培养基，’：K,HPO,0.7克 或（ 在以微生物为材料的遗传学研究中，广泛应用营 K,HPO,·3H200.92克），KH,PO,0.3克，柠檬酸 养缺陷型。用某些物理因素或化学因素处理细菌，使 钠 ·3H;00.5克，MgS04.7H,O0.01克，(NH,)zso, 基因发生突变，丧失合成某一物质 如（氨基酸，维生素， 0.2克，葡萄塘2克，蒸馏水100毫升，PH7.0，高压 核昔酸等）的能力，因而它们不能在基本培养基上生 灭菌8磅／时z30分钟。 长，必须补充某些物质才能生长。这样从野生型经诱 (7)混合氨基酸和混合维生素及核普酸的配制： 变筛选得到的菌株，称为营养缺陷型。筛选营养缺陷 氨基酸 包（括核昔酸）分7组 (I（-VII)，其中6组 (I（- 型菌株必须经过如下几个步骤：诱变处理，淘汰野生 VI）每组有 6种氨基酸 （包括核普酸），每种氨基酸 （包 型、检出缺陷型、鉴定缺陷型。本实验选择紫外线作为 括核昔酸）等量研细充分混合。第7组是脯氨酸，因为 诱变剂，并用青霉素法淘汰野生型，采用逐个测定法检 这种氨基酸容易潮解，所以单独成一组。 出缺陷型，最后用生长谱法鉴定缺陷型。 I.赖 精 甲硫 半Ift 眯 a吟 实验材料 大肠杆菌(Escherichiacoli)Kl2SF+ 11. 组 精 苏 羚脯 甘 嚓咤 实验准备 川·丙 甲硫 苏 轻脯 甘 丝 1．用具：灭菌培养皿 （9厘米），灭菌三角烧瓶 IV. 亮 半胧 谷 轻脯 异亮 撷 （15。毫升），灭菌吸管(1.5毫升），灭菌离心管。 v·苯丙 脸 天冬 甘 异亮 酪 2.培养基： VI·色 a吟 嚓咙 丝 撷 酪 (1)肉汤液体培养基：牛肉膏0.，克，蛋白陈 1 VII. 脯 克，NaCl0.，克，蒸馏水 100毫升，PH 7.2，高压灭 把维生素 B,,B=,B6，泛酸，对氨基苯 甲酸 菌 15磅／时215分钟。 (BAPA)，烟碱酸及生物素等量研细，充分混合，配成 (2)肉汤液体培养基 Z（E)：牛爵膏0.，克，蛋白 混合维生素。 陈 1克，NaCI0.5克，蒸馏水 50毫升，PH 7.2，高 3．生理盐水：NaCI0.85克，蒸馏水100毫升，高 压灭菌巧磅／时，巧分钟。 压灭菌15磅／时：15分钟。 （3）基本液休培养基：Vogel50x2毫升，葡萄塘 实验步骤 2克，蒸馏水98毫升，PH 7.0，高压灭菌8磅／时`30 1．菌液制备： 分钟。 (1)实验前 14-16小时，挑取少量 K12SF+菌， (4)基本固体培养基：琼脂2克，基本液体培养 接种于盛有5毫升肉汤培养液的三角瓶中，置379C培 基 100毫升，pH7．0,高压灭菌8磅／时，30分钟。 养过夜。 （，）无N基本液体培养基：K,HPO,0.7克 或（ (2）第二天添加 5毫升新鲜的肉汤培养液，充分 K,HPO,·3H,00.92克），KH,PO,0.3克，柠檬酸 钠 ·3