血培养SOP.doc

临床微生物实验室血培养操作标准 1 范围 本标准规定了血培养标本临床微生物检验的技术要求。 本标准适用于开展血培养的临床微生物实验室。 2 术语 一套血培养：从同一穿刺点同时采集的血液标本，分别注入需氧和厌氧培养瓶； 静脉输液缸：一种植入皮下，可长期留置在体内的静脉输液装置； HACEK菌群：嗜沫嗜血杆菌、人心杆菌、啮蚀艾肯菌和金氏金菌； 血培养污染率：一般由凝固酶阴性葡萄球菌、革兰阳性棒状杆菌、座疮丙酸杆菌和微球菌等污染引起的阳性瓶占总送检瓶数的比例。 3 导言 人体血液中有很多物质，包括溶菌酶、白细胞、免疫球蛋白、补体等，可在几分钟内将入侵血流的微生物清除。当微生物感染超出人体免疫系统的防御能力时，人体将不能将微生物局限于原始感染的部位，或在治疗中不能通过切除、引流等措施清除感染源，那这些微生物将侵入血液迅速繁殖形成菌血症或真菌血症。一过性菌血症常发生于对感染病灶的外科处理、黏膜的创伤操作和易污染的外科手术，亦可发生于感染性心内膜炎等血管内膜感染以及伤寒和波浪热的最初几周。菌血症是临床急症，应尽快采集血液进行培养。血培养是对入住急诊科、ICU患者、移植患者以及静脉插管患者的败血症进行早期诊断的一种方法，并根据阳性血培养病原菌的药物敏感性试验，可为临床医生提供最佳的抗菌药物治疗方案，对降低病死率有很大的帮助，血培养对于临床诊断和预后评估也有重要的意义。 4 血样采集和培养瓶接种 4.1 采血指征 可疑感染患者出现以下一种或几种特征时，可考虑采集血培养：发热（≥38℃）或低温（≤36℃）寒战，白细胞计数增多（计数10.0×109/L，特别有“核左移”时）或减少（计数3.0×109/L）7.2.1.2 双相培养基 同时含有琼脂和肉汤的血培养瓶，可用于成人或儿童患者的需氧菌、厌氧菌和分枝杆菌培养。培养瓶需要垂直孵育，同时观察肉汤和琼脂表面有无微生物生长。 7.2.1.3 溶血离心法 溶血离心法是将微生物从溶解的血液中释放出来后，通过离心将其与血液成分分离，因浓度不同而聚集在收集管底层的一种血培养方法。从溶血离心管底层沉淀物转移至固体培养基进行孵育。 7.2.1.4 孵育时间：手工法推荐35～37℃孵育7d，一些缓慢生长的苛氧病原菌（巴尔通体、李斯特菌属、布氏杆菌属和奴卡氏菌属）和双相真菌可能需要更长的孵育时间。手工法需要每天观察培养状态，如无生长迹象后摇动再孵育。 7.2.1.5 检测的频率和转种：手工法需每天或更频繁的观察微生物肉眼可见的生长，应特别注意孵育48h内的生长迹象。检测培养时需明亮的荧光灯或白炽灯，观察浊度、溶血、产气、表面菌落形成和血液颜色的改变，发现有微生物生长迹象进行涂片革兰染色和转种，根据涂片染色结果选择培养基类型。 7.2.2 自动化培养 原理：通过电子感应器检测微生物生长代谢的CO2浓度、监测其生长。 孵育时间：35～37℃孵育5d，包括布鲁菌属、嗜血杆菌属、放线菌属、心杆菌属、埃肯菌属、金氏杆菌属和营养变异性链球菌（乏氧菌属和颗粒链球菌属）也可检测出来。某些缓慢生长的苛氧菌（巴尔通体、李斯特菌属和奴卡菌属）和和双相真菌可能需要更长的孵育时间。血培养仪阳性报警后，立即进行涂片革兰染色和转种，根据镜检结果决定转种的培养基类型。 对于已使用抗菌药物治疗的患者，建议采用含树脂等中和物质的培养瓶，可提高细菌的检出率、缩短检出时间。 7.2.3 真菌血液培养 7.2.3.1 危险人群 真菌血症与创伤性或消化道粘膜溃疡、广谱抗细菌药物的应用、静脉营养、中心静脉插管和免疫抑制剂使用有关。 血培养中最常分离的酵母菌，包括白念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌和新型隐球菌，其它念珠菌（如克柔念珠菌、葡萄牙念珠菌和季尔蒙念珠菌）、糠秕马拉色菌、红酵母属和毛孢子菌属分离率较低。马内菲青霉素是最常见的双相真菌。荚膜组织胞浆菌、皮炎芽生菌、粗球孢子菌、镰刀菌、赛多孢菌、外瓶菌、喙枝孢霉菌少见，多在AIDS、血液恶性肿瘤、骨髓及器官移植和其它严重的免疫缺陷疫病的患者中分离出。 7.2.3.2 培养条件 酵母菌在需氧瓶中易生长。摇动肉汤培养可提高酵母菌的检出率，对于全自动商品化血培养系统或手工培养系统孵育最初24h的机械摇动都可实现。多数酵母菌孵育2～5d可检测出，某些酵母菌（如光滑念珠菌和新型隐球菌）可能需要延长孵育时间。糠秕马拉色菌需要在培养基中添加树脂（如橄榄油）。如果怀疑双相真菌或丝状真菌感染，孵育时间可能需要延长至2～4周。 7.2.3.3 方法—手工检测法 真菌血症检测的手工培养瓶包括：1）营养肉汤培养瓶，2）双相培养瓶，3）溶血离心培养瓶。酵母菌应用这三种培养瓶都可检测出，但是双相真菌和丝状