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电针对脑出血大鼠海马区Nogo―A表达的影响 　　[摘要] 目的 探讨电针对脑出血大鼠出血同侧海马区Nogo-A表达的影响及作用机制。 方法 将66只成年SD大鼠按随机数字表法分为对照组和脑出血组，脑出血组再随机分为非干预组和电针组，Ⅶ型胶原酶脑内注射诱导大鼠尾状核出血，电针组于造模次日开始电针干预，各组大鼠于第2、5、10、15天取出血侧海马C1区脑组织石蜡切片行Nogo-A免疫组化检测，每例脑组织取3张切片，每张切片于400倍光镜下随机选取5个互不叠加视野计数阳性细胞并取其平均值。 结果 脑出血组大鼠右侧尾状核区域有血肿形成；与对照组比较，非干预组与电针组海马区Nogo-A阳性表达水平均显著增强（P 　　1 材料与方法 1.1 材料 66只SD成年大鼠（11～12月龄），均雄性，体重200～250 g [成都医学院动物实验中心，合格证号SYXK（川）2015-196]；胶原Ⅶ型（Sigma）；兔抗大鼠Nogo-A抗体及SABC试剂盒（武汉博士德）；大鼠脑立体定位仪（江湾Ⅰ）；动物颅骨钻（ALC-CED） 1.2 方法 66只SD大鼠以1～66数字标识，随机分为脑出血组（n = 42）、对照组（n = 24），脑出血组又随机分为非干预组（n = 24）和电针组（n = 18）。参照王风波等[1]及杨洁等[4]的方法制备胶原酶脑内注射诱导尾状核脑出血模型：注射点定位矢状线右侧3 mm、前囟后0.5 mm，胶原酶与生理盐水配制为0.6 U/1.5 μL溶液，全程无菌操作，对照组假手术方法同脑出血组，以同等剂量生理盐水代替胶原酶。所有大鼠均常规饲养，保持室内温度24℃左右，干静阴凉，通风，相对湿度50%左右。术后第2天（24 h）随机处死对照组和非干预组大鼠各6只并取脑，观察脑出血情况，以SABC免疫组化法检测出血同侧海马C1区Nogo-A表达。大鼠右侧尾状核区域有直径约3 mm的血肿形成为脑出血造模成功。电针组大鼠造模次日开始电针干预，1次/d，共15 d。对照组及非干预组大鼠常规饲养，不予任何干预。各组大鼠分别于第5、10、15天行免疫组化Nogo-A检测 1.3 电针干预 电针组大鼠取穴百会、大椎、曲池及足三里，具体操作参照《实验针灸学》及王风波等[1]的方法，各穴均连接电针仪，频率5～10 Hz，以致大鼠头部轻微抖动为度，10 min/次 1.4 出血侧海马区Nogo-A免疫组织化学检测 免疫组化检测采用SABC法，阴性对照PBS代替一抗。光镜下Nogo-A阳性细胞显示为神经元胞浆内有棕黄色或棕褐色免疫颗粒。每例脑组织取3张切片，400倍光镜下随机选取5个互不叠加的视野，计数阳性细胞并取其平均值 1.5 统计学方法 采用SPSS 17.0软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间均数比较采用t检验，多组间均数比较用q检验，非正态分布及方差不齐用秩和检验。以P 　　不仅限于大脑组织内，有学者还发现大鼠脊髓损伤后少突胶质细胞和髓磷脂将细胞内的Nogo-A释放出到细胞外基质，在脊髓损伤区呈先抑后扬式表达，在损伤后第7天达高峰，14 d逐渐回落，但仍然高于假手术组水平，提示脊髓损伤后Nogo-A的高水平表达可能是阻碍神经系统恢复与再生的重要因素之一[11]。丁永利等[12]用Nogo-A抗体经蛛网膜下腔灌注脊髓全横断大鼠，每日1次，共10次，发现大鼠脊髓横断损伤区近侧端有较多的再生神经纤维，而损伤区的再生神经纤维很少，损伤区远侧几乎无神经纤维再生，说明抑制Nogo-A的阳性表达可降低神经轴突生长的抑制因素，间接促进中枢神经轴突再生，尤其是长纤维传导束的轴突再生能力 电针作为集针刺与电刺激优点于一体的治疗手段，应用于脑卒中已有较丰富和肯定的基础研究成果。梁艳桂等[13]电针取缺血再灌注损伤大鼠神庭、百会穴，观察到电针组大鼠脑梗死区面积明显减小，提示电针神庭、百会穴可降低脑梗死大鼠的梗死面积，促进脑损伤修复。褚鑫等[14]电针自体血注入法脑出血大鼠百会、人中穴，Berderson行为学评分显示脑出血组较对照组显著升高，电针组大鼠出血灶周围脑组织水肿减轻，炎症细胞减少，细胞排列规整，其中6 h电针组改善最为明显，提示早期电针干预对脑出血后脑组织修复具有积极的作用。有关电针在脑损伤后Nogo-A表达变化的基础研究等方面，陈成等[15]电针局灶性脑缺血大鼠天泉、曲泽、内关、大陵诸穴，分别检测脑梗死区和血清神经生长因子（NGF）与Nogo-A含量，实验结果显示电针可促进大鼠脑梗死区和血清中NGF的表达并降低血清Nogo-A的含量，二者作为神经修复矛盾的双方，在脑损伤后表达发生相反变化，说明电针既可改善大鼠脑缺血后突触超微结构，促进神经修复，又能够降低神经轴突