疟原虫镜检技术20133.ppt

血片的制作与染色 显微镜的使用与维护 5.对熟练的镜检员一般以镜检厚血膜为主,以提高阳性检出率，薄血膜可作虫种鉴定及形态识别之用。 6. 油镜使用完毕，需用擦镜纸沾取少量二甲苯将油擦去，并将残留的二甲苯擦 7.使显微镜的各部件恢复回原位，下降镜筒，使物镜呈“八”字形置于载物台上； 8 显微镜应存放在干燥阴凉的地方，不要放在强烈的日光下暴晒，如长时间不用，则光学部分应卸下放在干燥器中，以免受潮生霉； * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 2.疟原虫的厚薄血片都必须在油镜下观察，显微镜用光要充足，包括反光镜、光圈、聚光器要达到油镜使用的最佳限度。 3.如果不出现物象或者目标不理想要重找，在加油区之外重找时应按：低倍→高倍→油镜程序。在加油区内重找应按照：低倍→油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。 注意保护镜头，切不可压碎标本被片，损坏镜头。 4.视野模糊不清 显微镜问题： 镜头镜油用量、沾污灰尘或含有气泡； 油镜头破损、进油或有霉斑、灰尘； 显微镜用光调整不足。 血片问题： 载玻片不洁、毛玻璃样或有霉斑； 血片染色过度或血膜过厚。 谢 谢 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * PM 三日疟原虫 厚血膜 配子体 滋养体 裂殖体 由于在血膜制备过程中红细胞溶解，因而其原形态消失，且染液和玻片上可能存在杂质等，要根据疟原虫的三个基本要素仔细加以鉴别。 （1)疑似疟色素 厚血膜在制作和染色过程中，血膜上的染料残渣及空气中或耳垂上的尘埃，有时可误认为疟色素。 疟原虫与其他异物的鉴别 （2）疑似疟原虫核 细菌尤其是球菌或白细胞碎裂后散出的颗粒，常染成红色小点，常与疟原虫的核相似。 （3）疑似疟原虫胞浆 网织红细胞的残骸和白细胞的残骸，常被染成蓝色，颇似疟原虫的胞浆，有时因与上述红点巧合一起，而容易误认为疟原虫的大滋体，可依据疟色素的特点加以区别 疟原虫与其他异物的鉴别 薄血膜中常见的血液成分 血小板 中性粒细胞 单核细胞 淋巴细胞 嗜酸性粒细胞 （4）血液成份与分析 （5）杂质---类似疟原虫的物质 疟原虫与其他异物的鉴别 （6） 形态失常 疟原虫成份丢失。 成份增加。如在多虫感染、多核以及多虫重叠时疟原虫形态构造会有异于正常。 形态改变。恶性疟粗大的环状体。 药物影响。 服氯喹后,大滋养体胞浆停滞发育，失去阿米巴样形态，并发生碎解和色泽加深. 服伯喹后,配子体的核和胞浆破碎，疟色素粗大并相对集中等。 载玻片的清洗： 新玻片的清洗方法 用加有洗洁精或洗衣粉的热水洗涤，浸于95% 的乙醇中1小时以上 已用过的玻片：用加有洗衣粉的热水洗涤，浸于95% 的乙醇中1小时以上 载玻片 取血部位: 指尖 耳垂 血片制作 标准的推片姿势 血片制作 厚血膜的涂制： 取血液4-5μl 血滴置于载片的中央偏右1/3， 由里向外划圈涂成直径为0.8-1厘米 厚薄均匀、圆形厚血膜. 血片制作 薄血膜的涂制： 取血液1-1.5μl 血滴置于载玻片的中央， 将推片的一端置于血滴之前，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，两玻片保持20-30°角， 推成舌状薄血膜，长约2-2.5CM。 血片制作 每张载玻片上分别做1个薄血膜，1个厚血膜。标准血膜的位置如下图所示。 血片制作 厚、薄血膜优缺点 厚血膜 薄血膜 优点 血量多，面积小，原虫检出率高 红细胞完整，原虫形态改变不大，原虫易于辨认 缺点 原虫在干燥过程中皱缩，红细胞消失，原虫变形较大，原虫鉴定困难 血量比厚血膜少许多，面积比厚血膜的大。检查费时，原虫检出率较低 用途 用于疟疾病人检查 原虫虫种、虫期鉴定及初学者教学标本 血片染色 两种染色方法: 吉氏染色法 瑞氏染色法 常用吉氏染色法 血片的染色 待血片完全干燥后才可染色 1．血膜的固定--甲醇 吉氏染液：染色方法 薄血膜经甲醇固定干燥后，将血片平放， 用PH7.0-7.2的磷酸缓冲液或蒸馏水将吉氏原液稀释，原液与缓冲液为1:20。混匀 染色20-30分钟，晾干镜检。 厚血膜溶血染色 放置多时未染色的血片（2天以上，薄片已用甲醇固定），在染色之前，须在厚血膜上用清水进行溶血，待血膜全部溶解后倒掉，用吉氏染液染色,清水漂洗干净,晾干。 染色用水和冲洗用水 pH7.0～pH7.2缓冲蒸馏水效果最佳。 先制备好两种贮备液 贮备液I 1/15M磷酸氢二钠（Na2H