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第五章 微生物的生长繁殖与生存因子 第一节 微生物的生长繁殖 一、微生物生长繁殖的概念 二、研究微生物生长的方法 三、细菌生长曲线在污（废）水微生物处理中的应用 四、微生物生长量的测定方法 一、微生物的生长繁殖的概念 二、 研究微生物生长的方法 （1）活细菌重量变化曲线 ①增长速率上升阶段 提问：为什么培养初期细菌群体重量增长速率随时间不断增大？ A.营养物丰富，细菌增殖；B.细菌在细胞内以糖原、油滴等形式储存营养物，细菌个体重量增大 ②增长速率下降阶段 提问：为什么增长速率较前下降了？ ③内源呼吸及死亡阶段 ———内源呼吸+毒物浓度更高 （个体）瘦→死 （群体）死亡率大于出生率 从曲线上反映为活细菌重量的进一步持续下降。 提问：此时细菌的出生率是否为零呢？为什么？ 不是，利用死亡细菌的残体营养 2．细菌数量生长曲线 （1）停滞期 特征： 影响停滞期的因素： 接种量 接种群体菌龄 营养 提问：根据上述原因选择接种何种状态的细菌迟缓期会较长？ 对数期的细菌、静止期或衰亡期、受损细胞、富集培养基的细菌 后三种 在实际工作中如接种菌种以启动新的水处理设施，投加新鲜污泥时，接种的细菌不习惯于新环境，会出现或长或短的迟缓期，迟缓期的出现会增加操作时间，降低工作效率 （2）对数期 所有细菌均繁殖 特点 平均代时（繁殖一代的时间）最短 提问：细菌的代时与哪些因素有关？ 对数期细菌代时G计算 此时所有细菌在二分裂生长,分别测定t0时刻与t时间细菌的数量X0与X （3）静止期 出生率＝死亡率 （4）衰亡期 死亡率＞出生率（相当于重量法的内源呼吸阶段） 由于营养物被耗尽，细菌因缺乏营养而利用贮存物质进行内源代谢，即自身溶解。细菌在代谢过程中产生的有毒代谢产物，会抑制细菌生长繁殖。死亡率增加，活菌数减少，甚至死菌数大于新生菌数。 活性污泥法中的序批式反应器（SBR）法是将分批培养的原理应用于污水生物处理的实例。 是在微生物的整个培养期间，通过一定的方式使微生物能以恒定的比生长速率生长并能持续生长下去的一种培养方法。 （1）恒浊连续培养 恒浊——培养基浊度恒定（实质是细菌数量恒定） （2）恒化连续培养 化——？ 目前, 污水连续生物处理法均类似于恒化连续培养；（流速不完全恒定） 4．污(废)水连续处理中的细菌生长状态 不同的生物反应器， 细菌的生长状态可能不同！ 四、微生物生长（数量）测定方法 （1）直接计数法 （测定微生物总数） 借助显微镜观察测定 1.涂片染色法 2.计数器(血球计数板）测定法 3.比例计数法 比例——样品菌液与等体积的血液混合，观测二者比例 4．比浊计数法 浊——细菌悬浮液的浊度 4．比浊计数法 浊——细菌悬浮液的浊度 （1）制标准曲线（OD~No） （2）测菌液浊度，查图表得出细菌数量 （二）间接计数法(活菌计数法) 提问：前述方法中计数的不都是活菌，如何分辨菌死活？ 繁殖 提问：细菌繁殖的可见现象是什么？ 产生菌落（固体培养基培养）、菌液混浊（液体培养基培养） 计数原理：一个细菌可繁殖成一个菌落或一群细菌. 缺点：慢 分固体培养法和液体培养法 一般计数平板的细菌生长菌落数以30~300个为宜。 2.稀释液体计数法 特点：液体培养、统计学查表计数 又称MPN法 （或最可能数法） Most Probable Number 例如测定SRB（硫酸盐还原菌，厌氧）的数量 提问：能用稀释平板法计数吗？为什么？ 一般不能，厌氧菌暴露在空气中不能生长（除非厌氧培养箱） (4)统计－查表－计算 根据不同稀释度变黑试管 ①统计出数量指标 三位数及其中最低稀释度 （取变黑的管数最多、稀释度又最低的生长管数，为第一位数字，后面两个稀释度的生长管数后两位数） 提问：上例情况而言统计数量是几？ ②查表 表——MPN表 MPN三管法测数统计表 3.薄膜计数法 薄膜——微孔滤膜（φ0.45um） （3）统计计数 提问：假如 测出250个菌落，抽滤了50ml自来水，自来水中菌浓度是多少呢？ 250÷50ml=5个/ml自来水 样品中的细菌数量=菌落数÷抽滤样品的体积数 (三)重量法（计算生长量） 提问：已知什么条件通过测定细菌群体重量知道其数量？ 已知单个细菌的平均重量 除法计算 细菌的湿重量＝10-15~10-11g/个细胞 干重约为湿重的10％~20％。 1. 干重法 悬浮物＝无机物+有机物（包括细菌） 提问：如何确