第二十章全身用药的毒性研究.ppt

一、静脉注射制剂的全身毒性试验 根据我国药政部门的规定，静脉注射制剂必须进行全身毒性试验，又叫常规安全性评价，主要包括血管刺激性试验，体外流血试验，过敏性试验，热原试验等。现介绍如下： (一)血管刺激试验 目的：观察受试静脉注射剂经多次静脉给予后对血管刺激的情况。 方法：取6只家兔，在试验开始前预先饲养一周以观察动物活动表现。将家兔随机分成2组，每组3值，一组为受试药物组，另一组为生理盐水组。观察家兔耳静脉注射后血管的刺激反应情况，肉眼观察是否出现明显的肿胀、充血和坏死等刺激症状。生理盐水组注射等量生理盐水，每天一次，连续三天。在第四天取家兔耳注射部位和向前5cm部位的血管组织作病理切片检查。以病理组织等检查结果判定受试药物有无血管刺激作用。 (二)体外溶血试验 目的：观察静脉注射剂是否发生溶血现象。 方法： (1)制备2％红细胞悬液：取家兔颈动脉血l0ml，除去纤维蛋白，反复离心洗涤后，用生理盐水配成2％红细胞悬液供试验用。 (2)取试管7支，按表顺序加入药物及其他试剂，1、2、3、4、5管加不同剂量的受试药，6管加2.5ml0.9%氯化钠注射液，作为阴性对照，7管加2．5ml蒸馏水，作为阳性对照。摇匀后，用封口胶纸将试管口封好，置37~C恒温水浴，保温4小时。 管 号 1 2 3 4 5 6 7 2%红细胞（ml） 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 受试药物（ml） 0.5 0.75 1.0 1.5 2.0 - - 生理盐水（ml） 2.0 1.75 1.5 1.0 0.5 2.5 - 蒸馏水（ml） - - - - - - 2.5 体外溶血加样表 (3)结果观察：1小时前每30分钟观察一次，1小时后每小时观察一次，共观察4小时。 全溶血：溶液澄明，红色，管底无红细胞残留。· 部分溶血：溶液澄明，红色或棕色，底部尚有少量红细胞残留。镜检红细胞稀少或变形。 不溶血：红细胞全部下沉，上层液体无色透明。镜检红细胞不凝集。 凝集：水不溶血，但出现红细胞凝集，凝集物在试管，经振摇后不能分散，在显微镜下玻片上凝集红细胞不能被冲散，或出现药物性沉淀。 具有溶血和凝聚作用的药物不宜作为注射用，最好是药液在3小时内不引起溶血。观察是否溶血，必要时用显微镜观察红细胞是否破裂。 (三)过敏性试验 目的：观察受试药物经注射给药后有无变态反应。 方法：取豚鼠18只，随机均分成3组。按无菌操作，给药组、生理盐水组、阳性致敏组分别隔日腹腔注射受试药物、0.9％氯化钠注射液、1％新鲜鸡蛋清各0.5ml／只，共3次。首次注射后的第14日和第21日，每组分别取3只豚鼠，分别由前肢静脉注射受试药品1．0ml／只，观察有无抓鼻、竖毛、咳嗽、呼吸困难、痉挛、休克直至死亡等变态反应出现(见表)。反应级数 豚鼠变态反应级数判断标准 反应级数 反应症状 0 无明显反应 1 只有轻微抓鼻、颤抖或竖毛 2 有几次咳嗽、抓鼻、颤抖或竖毛 3 多次或连续咳嗽、伴有呼吸困难或痉挛、抽搐 4 痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡 (四)热原试验 目的：将一定剂量的受试药物静脉注射给予家兔，观察家兔体温升高情况，以判定受试物是否有致热原作用。 方法：取家兔3只，测定其正常体温后15min以内自耳静脉缓慢注入规定剂量并温热至约38℃的受试物溶液。然后每隔1h测定体温1次。共测3次，以3次体温中最高一次减去正常体温，即为该家兔体温升高度数。如3只家兔中有一只体温升高0.6 ℃以上；或3只家兔体温升高量均低于0.6 ℃ ，但升高的总数达1.4℃以上时，应另取5只家兔受试，检查方法同上。 复试的5只家兔中，体温升高0.6 ℃或以上的家兔不超过一只，并且初试复试合并8只家兔体温升高总数不超过3.5 ℃时，可认为受试物符合热原检查规定；否则认为不符合热原检查规定。 二、局部用药的全身毒性试验 局部用药是指皮肤用药、眼科用药、滴鼻剂、吸人剂、直肠、阴道制剂等引起全身毒性试验，这些制剂的毒性试验见第二十二章。 给药时间的重要性也越来越引起人们的重视， * 口服给药大鼠一般常用灌胃，灌胃的容量为每天1—2ml／lOOg，也可将受试药物混在饲料或水中给予，但要保证每只动物按规定剂量在一定时间内服人，静脉注射大鼠时可采用腹腔代替，各剂量组采用等容量不等浓度给药。特殊情况另作说明。 * 左边试管：没有发生溶血现象的血红细胞的悬浮液，淡红色不澄清。中央试管：静置后的悬浮液，上半部分澄清无色。右边试管：正常溶血现象，红色液体澄清，长期静置无沉淀。 * 小鼠体重18-22g，大鼠体重160-180g 犬的年龄一般为4—6月龄，猴的年龄一般为2—3岁 动物体重每组的差别要求不超