酶工程和蛋白质工程2.ppt

酶 工 程 尹春艳 2012.9.10 回顾知识点 1. 细胞工程： 细胞水平上的遗传操作，即通过细胞融合、核质移植、染色体或基因移植以及组织和细胞培养等方法，快速繁殖和培养出人们所需要的新物种的生物工程技术。 细胞工程 细胞工程的三大基本操作技术 无菌操作技术 细胞培养技术 细胞融合技术 细胞工程 细胞工程的三大基本操作技术 细胞融合的技术流程 原生质体的制备 诱导细胞融合 原生质体的再生 杂合细胞的筛选 细胞工程 细胞工程的三大基本操作技术 细胞融合的技术流程 4. 植物组培的基本过程 一. 酶工程的研究内容 酶工程是研究酶的生产和应用的一门技术性学科。 酶工程以实际应用的要求为目的研究酶的特性，同时利用酶的催化特性进行酶催化的有用物质的生产或有害废物的分解。 酶工程的研究内容 酶的生产和制备； 酶分子的修饰； 酶分子的固定化； 酶反应器、生物传感器、生物芯片等； 二、酶的生物学特征 1. 酶的化学本质 酶的化学本质是蛋白质。 2. 酶的特异催化功能 1）高效性 2）特异性（即一种酶只能催化一种或一类结构类似的底物进行某种类型的反应）。 酶反应的活性可以调节： 酶浓度的调节； 共价修饰调节； 酶原的活化； 抑制剂的调节； 反馈调节。 酶是生物催化剂。 a. 所有的酶都是由生物体产生的。 b. 酶与生命活动密切相关。 三、 酶的作用原理 1. 酶的化学组成： 单纯酶 结合酶（酶蛋白质和非蛋白质两部分） 酶活性中心：酶蛋白分子中由必需基团所组成的、具有一定空间结构的活性区域。 必需基团 2. 酶的分类与命名 3. 酶作用原理 （1）中间络合物学说：底物先与酶结合成不稳定的中间络合物， 然后再分解释放出酶与底物 证实：H2O2 + 过氧化物酶 （H2O2 —过氧化物酶） （ 褐色） （ 红色） 645\587\548\498nm 561\550nm （H2O2 —过氧化物酶）+ AH2 过氧化物酶 + A + 2H2O （ 红色） （ 褐色） （2）锁－钥匙学说：1890年Fisher提出。 该学说认为酶的天然构象是刚性的，如果底物分子结构上存在着微小的差别，就不能契入酶分子中，从而不能被酶催化。 （3）诱导－契合假说:Koshland提出 当酶分子与底物接近时，酶蛋白受底物分子的诱导，其构象发生了有利于底物结合的变化，酶与底物在此基础上互补契合，进行反应。 四. 酶催化反应动力学 1. 概念 热力学：研究一个反应能否进行，进行的程度（反应物转化成产物的多少），只考虑始态、终态，不考虑历程（如何反应）。 化学动力学：研究（1）反应速度（2）反应条件对速度的影响（3）反应步骤（4）反应机理（以便估价、控制、应用）。 酶促反应动力学：研究酶促反应的速度和影响此速度的各种因素以及反应历程。 2. 底物浓度[S]对酶促反应速度V与底物浓度[S]的关系 MichaelisMenten提出的著名的米氏方程 根据如下现象的观测： 当底物浓度较低时候，反应速率与底物浓度成正比，即符合一级反应动力学；当底物浓度较高时，反应速率与底物浓度无关，即符合零级反应动力学 当酶的浓度大大小于底物浓度时，反应速率与酶的加入量成正比 根据中间络合物假说， MichaelisMenten提出单底物酶催化的反应机理如下： 式中，E代表游离酶，ES为酶与底物的复合物；S为底物；P为产物；k+1,K-1,k+2为相应各步反应的反应速率常数。 MichaelisMenten进一步假设： 与底物浓度[S]相比，酶的浓度[E]很小，因而可忽略由于生成中间复合物ES而消耗的底物 考虑反应的初始状态，此时产物P的浓度为零，可忽略反应的逆反应的存在 假设基元反应ES E+P的反应速率最慢，为上述步骤的控制步骤，而S+E ES的反应速率很快，可快速达到平衡状态。 在此基础二人提出了“米氏方程”： 3. 温度对酶催化反应速率的影响 在Topt之前，T↑、V↑△T=10℃，反应速度增加1～2倍 在Topt之后，T↑、V↓ 注意： （1）动物体内最适T 一般30-50℃，植物40-60℃，有少数酶能耐较高的温度，如某些细菌中分离的DNA 聚合酶，最适温度可达70℃，细菌淀粉酶在93℃下活力最大。 （2）最适T，不是酶的特征常数，它与酶作用时间的长短、底物种类