蛋白质的沉淀与透析课件.pptxVIP

蛋白质的沉淀与透析;一、实验目的;二、实验原理 ;三、器材与试剂;四、操作步骤;3、蛋白质的透析 （1）准备透析袋 市售的透析袋有重金属、硫化物等化学杂质，须除去杂质后才能使用，常用的方法是用10mmol/LNaHCO3-1mmol/LEDTA-Na2溶液煮沸30min，然后用双蒸水充分洗涤透析袋，储存于1mmol/LEDTA-Na2溶液中，4摄氏度保存备用。 （2）装样? 取一段透析袋，将其一端用透析袋夹夹住（或打一死结），由开口端加入含清蛋白沉淀的溶液（不可装的太满，留出一半空隙，并适当排出空气，以防透析袋胀破），用透析袋夹夹住袋口（或打一死结）。??? ;（3）透析 如右图，取一个大烧杯，加入10倍以上样品液体积的去离子水或缓冲溶液，将装好样品的透析袋悬于大烧杯中部，底部放一个磁子，用磁力搅拌器缓慢搅拌以促进溶液交换，透析过程中需更换洗脱溶液数次（约30min一次）???至达到透析平衡为止（洗出液中无Clˉ和NH4+），约需2h。;?（4）检查透析效果? 每次更换洗脱液时，同时检查洗出液中是否有Clˉ。 Clˉ检查方法: 取试管一支，加入洗出液约2ml，加10％HNO3溶液1-2滴至酸，然后加1％AgNO3?2-3滴，观察是否有白色沉淀。;五、要点提示??;六、思考题;谢谢观看！