人HTR1E基因在不同细胞系及多种组织中的表达及其功能.pdfVIP

人HTR1E 基因在不同细胞系和多种组织中的表达及 其功能1 吴艳阳，孙一兵，刘如石，甘露，刘明俊，贺爱兰，胡翔，周建林，张健* 湖南师范大学生命科学学院蛋白质化学与发育生物学教育部重点实验室，长沙（410081 ） E-mail：zhangjian@ 摘 要：人的HTR1E 基因是五羟色胺受体（HTR ）家族中的一员。这个家族里面的基因都 和精神分裂症，抑郁症以及人的自杀活动有关，但是对于其具体的作用机制目前研究不多。 本文采用实时定量PCR 方法分析了HTR1E 基因在各个组织和不同细胞系中的表达情况，亚 细胞定位发现 HTR1E 位于细胞膜上，萤光素酶实验分析确定 HTR1E 可以抑制原癌基因 erbB2 启动子的转录活性。这些研究结果为进一步研究HTR1E 基因在疾病发生中的作业奠 定了一定的基础。 关键词：HTR1E ；表达谱；实时定量PCR；转录活性 中图分类号：Q7 1. 引言 人类的五羟色胺受体可以分为 7 种类型，即 5-HTR1~7，这 7 种类型又可以分为 14 种 亚型，分别为：HTR1A, HTR1B, HRT1C,HTR1D, HTR1E, HTR1F, HTR2A, HTR2B, HTR2C, HTR3A, HTR4, HTR5A,HTR6,HTR7 。有研究表明HTR7 和 HTR4 都可以激活转录因子固醇 反应元件 （serum response element，SRE）的转录活性，在 NIE-115 细胞系中过表达 5-HT4(a) [1] [2] 可以使其变圆 。在海马神经元中，HTR7 有使神经轴突变长的功能 。HTR1B 能够和 S100A10, p11 (annexin 2 light chain)蛋白质发生相互作用，而且发现 HTR1B 对下游 ERK1/2 的 Thr202/Tyr204 磷酸化具有调控作用, 而且可以通过和 p11 相互作用抑制神经冲动的传导 [3] 。人HTR1E 基因位于染色体的 6q14-q15 [4] ，并且含有 7 个跨膜结构域，因此属于 G-蛋白 偶联受体家族。目前发现此蛋白质在背根神经中枢有表达[5]，并且具有抑制 cAMP 的形成， 而且在去甲肾上腺素、肾上腺素、组氨、多巴胺和腿黑激素的刺激下，其蛋白质的表达情况 没有任何变化[6] 。研究发现在阻断剂methiothepin 的刺激下，HTR1E 抑制 cAMP 的形成作用 消失[7] 。有研究表明，五羟色胺诱导钙离子释放是通过激活 5HTR1E 来实现的，而且发现 HTR1E 可以调节细胞因子 IL-6 和 CXCL8/IL8 的释放。因此HTR1E 可能在激活各种细胞信 号途径以及调节细胞因子的释放起到了很重要的作用[8] 。我们通过对 HTR1E 基因在各个组 织和细胞系中的表达情况以及亚细胞定位分析，为以后对 HTR1E 功能的研究打下基础。 2 ．材料与方法 2.1 材料 真核表达载体 pEGFP-C3 和含有erbB2 启动子的报告基因 pTAL-luc-erbB2 购自 Clontech 公司，pMD18-T 载体、不含 erbB2 启动子区域的报告基因的载体 pTAL-luc 、各 种限制性内切酶、T4DNA 连接酶、T4 聚合酶及反转录试剂盒购自 TaKaRa ， LipofectamineTM 2000 转染试剂盒，总 RNA 提取的 TRIZOL 试剂购自 Invitrogen ， luciferase assay 试剂盒购自 Promega ，SYBR Green I 荧光染料实时定量 PCR 试剂盒购自 Applied Bio systems 公司，倒置荧光显微镜为 Zeiss 产品，PE 全自动荧光定量 PCR 仪为 美国 ABI 7900 产品，荧光分光光度计 TD-20/20 为美国产品。T47D、HeLa 、He