人体尿液中尿酸、马尿酸与高香草酸的反相液相色谱(RPLC)测定.pdf

研究报告 人体尿液中尿酸、马尿酸和高香草酸 的反相液相色谱(RPLC)测定 商振华 包绵生 陈谨之* 卢佩章 （中国科学院大连化学物理研究所） 近年来尿酸 (UA)、马尿酸 H（A）和高 pH计：天津产PHS-73型精密酸度计 香草酸 H（VA）等尿中有机酸的高效液相色 数据处理和记录：P-E公司SigmalOB微处理机及日立 056双笔记录器 谱测定发展非常迅速[1-6]。UA，HA在尿中 2 溶剂和标样 含量的变化可反映肝脏、肾脏 的实质性病 UA、HVA是日本进口色谱纯试剂，其余均为国产分 变，恶性贫血和某些肿瘤病人尿中HVA的 析纯试剂。称取一定量样品溶解在0.1NHCl溶液中作为标 含量会显著增高[7-9]。某些职业病，如甲 准试样。 苯、铅中毒也会引起它们含量的明显变化， 3．尿样前处理方法 因此可把它们作为这些疾病临床化验 的指 （1）取5毫升尿液用6NHCl调pH到2，在3500rpm 标。本实验采用 YQG-C16键合相柱，以甲 转速下离心10分钟，过滤后作色谱分析。 （2） 乙腈去蛋白：取5毫升尿液用5NKOH溶液调 醇-水和四氢呋喃-水作移动相，直接对尿中 pH到8.59.5，加入5毫升乙腈，振摇并离心后取适量上 的这些有机酸进行了有效的分离，采用紫外 层清液分析。 吸收检测器和外标法进行了定性定量测定， （3） 乙酸乙酯抽提：取100毫升尿液用6NHCl调pH 为临床分析提供了一个简便的方法。 到2，再加入5毫升乙酸乙酯，振摇并静置后取2毫升乙 酸乙酯抽提液于80℃水浴上蒸发到干，再用2毫升水溶解 实 验 后备用。 1．仪器和设备 色谱仪：美国P-E公司产Series3型 结 果 和 讨 论 检测器：P-E公司LC-65T及西德Biotronik公司BT- 为了分离和测定表 1所列的有机酸，选 3030紫外可见分光光度计 用甲醇 KH2PO4缓冲液作移动相，用醋 色谱柱：2504.6毫米， 本实验室合成的YQG- C165）为填料，采用匀浆法自己装填，柱效2万塔板／米 酸调节其pH值到2.90，在YQG-C16柱上获 进样阀：Rheodyne六通阀，进样量，10微升 得了满意的分离，结果如图1所示。 表 1 所 测物 质 的 名称及 结构 式 用上述三种前处理方法所得的尿液进行 色谱分离，其结果无甚差别。我们采用了手 续较简便的 （1）法定量，在三个月内柱效基 本不变。 移动相中含4％MeOH时标样和尿样的分离 本实验采用保留时间，改变移动相组成 情况。采用不同含量有机改性剂作移动相所 和pH值，增量法及紫外光谱图对尿中UA、 测得的UA、HA及HVA的保留时间及实验 HA和HVA进行了定性。图2 A和B是用11％MeOH，89% 0.01MKH2PO4(pH＝2.90)作 冲洗剂时，标准样和尿样在 UV-280和UV-254nm同时 检测的结果。由图看出：UA， HA在254nm的吸收比280nm