B72PE40新型重组融合外毒素的分子生物学特性预测3.pdfVIP

( ) 中国实验血液学杂志　Journal of Experimental Hem atology 2001 ; 9 4 3·27 · B7PE40 新型重组融合外毒素的分子生物学特性预测 1 1 张惠丽 　　奚永志 　　孔繁华 　　陈汝光 　　袁志宏 　　刘 　楠 　　关海容 (军事医学科学院附属医院免疫学研究室 　　北京 　100039) 摘要 　　为探讨构建的重组外毒素融合蛋白B71LinkerPE40 和B72LinkerPE40 及其接头设计 的合理性 ,应用核酸和蛋白质序列分析软件系统 GOLD KEY ,对上述重组外毒素融合蛋白的柔性、 抗原性、亲水性、表位和二级结构等分子生物学特性进行了计算机模拟预测。结果发现它们分别保 留了B71 ,B72 和 PE40 的表位特征 ,没有出现新的表位 ,其柔性接头处的抗原性也极低。与B71 , B72 和 PE40 的一、二级结构比较发现 ,这两种融合蛋白各有数个氨基酸残基改变 ,有的氨基酸改 变可轻微影响融合蛋白的二级结构。原核表达的两个融合蛋白经 Western 印迹分析显示 ,它们能 分别与 B71 ,B72 和 PE40 单克隆抗体发生特异性结合 ,表明它们较好地保留了 B7 和 PE40 的抗 原性和空间结构 ,与预测的结果一致。提示预测结果会有助于我们研究该系列融合蛋白的体内、外 生物学效应 , 以及设计构建新的其他融合蛋白。 关键词 　　B7PE40 重组融合外毒素蛋白 　　分子结构预测 　　计算机模拟 中国图书资料分类法分类号 　　R318. 5 　　R392. 4 　　组织器官移植已成为治疗晚期器官功能衰竭和 测了B71LinkerPE40 和B72LinkerPE40 的二级 白血病的重要措施之一,如何使所移植的器官或组 结构和其它相关分子生物学特性 ,诸如柔性、抗原 织长期存活并减轻移植后所产生的 HV GD 或 性、亲水性表位 ,并与 B71 ,B72 , PE40 分别进行了 GV HD ,则是人们长期以来关注的焦点。在众多参 比较, 以判断该融合蛋白及其接头设计的合理性。 与移植排斥反应的细胞因素中 ,CD4 + ,CD8 + T 细胞 处于中枢地位 ,它从激活到发挥生物学效应需经三 材料与方法 个阶段。实验表明 ,第一、二阶段的阻断只起到了免 疫抑制的作用 , 而阻断第三阶段 B7 : CD28CTLA4 B71 , B72 及 PE40 基因的克隆及序列分析 共刺激信号系统 , T 细胞则产生免疫无能。因此 , 自 详见文献[4 - 5 ] 。 90 年代研究者们试图通过选择性阻断 B7 : CD28 融合蛋白的构建 CTLA4 系统 , 以达到诱导免疫耐受和防治移植排斥 通过引物设计 ,采用重叠延伸的基因融合策略 [ 1 ] 反应 , 已取得重要进展 。 (SOE) , 分别将 B71 和 B72 的胞外结合片段与 新近我们根据细胞因子受体导向杀伤理论 ,提 PE40 的转移杀伤功能区片段连接成 B71Linker 出了探索性研制B7PE40 外毒素融合蛋白选择性 PE40 和 B72LinkerE40 融合基因 ,并在两端分别 阻断B7 :CD28CTLA4 系统 , 以达到特异性诱导免 引入了 EcoR ⅠSma Ⅰ和Mun ⅠSma Ⅰ酶切位点。 疫耐受的策略 ,并成功地设计构建了两种新型B71 所得的特异性扩增