现滩羊卵母细胞体外成熟体系建立.docVIP

宁夏大学新华学院 毕业论文（设计） （ 2013 届） 题 目 滩羊卵母细胞体外成熟体系建立 专 业 生物技术 年 级 2009 学生学号 12009248152 滩羊卵母细胞体外成熟体系建立 摘要 在细胞核移植过程中，体细胞必须在卵母细胞内进行重编程以恢复其全能性，卵母细胞成熟度直接影响体细胞重编程，故卵母细胞体外成熟培养是体细胞核移植极其重要环节，而卵母细胞又受环境，培养液浓度，培养温度等影响。本实验通过探讨不同浓度的 FSH 和 LH 及 HMG影响滩羊卵母细胞体外成熟因素的研究，建立滩羊卵母细胞体外成熟体系，为滩羊核移植及以后的优良育种奠定基础。 关键词：卵母细胞;FSH:LH;HMG;体外成熟；滩羊 Reprogramming of somatic cell directly, so that oocytes in vitro maturation plays an extremely importomt role in nuclear transplantation of somatic cell. However ,oocytes are affected by environment, medium concentration, culture temperature and so on ; in the research we studied the effore of different density FSH and LH and mixture of FSH and LH, HMG density, on oocytes in vitro maturation in tan sheep and established a system of oocytes in vitro maturation in tan sheep, laying the foundation for advamced breeding and nuclear transplantation of tan sheep Keywords: vitro maturation; FSH ; LH ; HMG; tan sheep 目录 前言 1 1实验材料与方法 4 1.1实验材料 4 1.2 主要仪器和耗材 4 1.2.1主要仪器 4 1.2.2 试剂 4 1.3试验方法 5 1.3.1 卵丘-卵母细胞复合体（cumulus oocyte complexes, COCs）的收集： 5 1.3.2 卵丘-卵母细胞复合体的体外成熟培养 5 1.3.3 卵母细胞体外成熟效果判断： 6 2.实验分析 6 2.1 FSH和LH对滩羊卵母细胞体外成熟的影响 6 2.2 HMG对卵母细胞体外成熟的影响 8 3 讨论与分析 10 4结论： 11 参考文献 12 13 前言 滩羊是我国独特的裘皮用绵羊品种，是国家二级保护品种，2001年被农业部 列入第一批畜禽品种保护名录。其所产二毛皮毛色洁白，光泽悦目，花称美观。滩羊羔羊肉脂肪分布均匀，肉质细嫩,腥味小，是“宁夏羊肉”的代表，已享誉全国。宁夏是滩羊的主产区，在保护滩羊种质资源特色的同时，对滩羊繁育性能的改良是宁夏滩羊产业发展的共性需求[1]。动物体细胞克隆技术为动物育种技术开辟了更广泛的途径，必将极大地提高动物育种的效率。也为我区动物育种产业的发展提过了技术支撑。 在体细胞核移植中体细胞必须在卵母细胞内进行重编程以恢复其全能性，而卵母细胞的成熟度则会直接影响体细胞的重编程。所以卵母细胞的体外成熟，作为体细胞核移植过程中的一个重要环节被人们关注。自Edwards R G Maturation通过体外培养使小鼠、绵羊、 猴、猪、牛、人[2]等哺乳动物的卵母细胞在体外获得成熟后，许多科研工作者在卵母细胞的体外成熟上做了大量的工作，通过在卵母细胞体外培养液中添加血清[3]、雌激素[4]、FSH、LH[5]等物质，使哺乳动物卵母细胞体外成熟率得到不断提高。随着卵母细胞体外培养技术日益成熟，体外成熟的卵母细胞正在广泛应用于体外受精，用于扩繁优良母畜。 宁夏是滩羊的主产区，滩羊产业也是宁夏自治区畜牧业中的支柱产业之一，也是全区最具有发展潜力的优势特色产业。近几年，由于我区加快了从区外、国外引进优良品种绵羊的速度，这虽然对发展我区养羊业、增加农民收入，确实起到了很大的促进作用，但也使我区的滩羊产业受