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- 2017-06-04 发布于河南
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实验 聚丙烯酰胺
实验 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白
11级医学检验四小组
实验目的
掌握盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理
熟悉盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术
实验原理
以聚丙烯酰胺凝胶做支持物的电泳技术是聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。
聚丙烯酰胺凝胶是单体聚丙烯酰胺(Acr)和交联剂甲叉双丙烯酰胺(Bis)交联而成的,催化剂为过硫酸铵(AP),加速剂为四甲基乙二胺TEMED, 形成三维网状凝胶。
聚丙烯酰胺凝胶(PAG)的聚合反应:
由单体聚丙烯酰胺(Acr)和甲叉双丙烯酰胺(Bis)交联而成的三维网状结构凝胶。
Bis:交联剂
过硫酸铵(AP) :引发剂,提供自由基,
引发聚合反应
四甲基乙二胺(TEMED):催化剂, 加快引发 释放自由基的速度
三大效应
聚丙烯酰胺凝胶电泳采用不连续系统(即缓冲液成分、pH及凝胶孔径不连续)聚丙烯酰胺凝胶电泳,通过浓缩效应、分子筛效应、电荷效应,将血清中各蛋白质成份依其分子大小、电荷多少不同而进行高效分离。
1. 浓缩效应
分离机制:
凝胶层孔径不连续:浓缩胶大孔径,分离胶小孔径
缓冲液离子不连续:电泳液中Gly-(慢离子);
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