HE染色切片的技术操作规范.pdfVIP

2004 年第 2 期 　　　　　　　　　　　　大同医学专科学校学报 2 1 H E 染色切片的技术操作规范 ① ② 王满贵 　宋志宙 ( ) ( ) ( 　　苏木精 Hat matoxylin - 伊红 Eo sin 染色 以 1. 8 　贴片要定向定点 ,顺方向贴在载玻片的中下 ) 下简称 HE 染色 是形态组织病理学最常用的、必不 1/ 3 处 ,贴片后在空气中稍晾干 , 即可烤片 。血液 、 可少的普通染色 ,在医学领域的教学 、医疗和科研工 皮肤要及时烤片 , 时间约为半小时 ,温度在 60 度～ 作中有着重要的作用 。HE 染色制片的好坏在很大 64 度 ,使切片与载玻片粘贴更紧 , 肉眼观察组织周 程度上影响病理医生作出病理诊断的正确性 。 围石蜡熔化即可 。 1 　制片 2 　染色 1. 1 　切片是制片和染色的前提 。切片的规范是 :切 2 . 1 　染色前的处理 片完整 、薄而均匀 、无皱折 、无刀痕 、染色清晰 ,透明 先用二甲苯溶解切片上的石蜡 ,再用由高到低 度好 ,无固缩 、龟裂 、污染 ,封胶适当 ,字体端正 ,号码 浓度的酒精洗掉二甲苯 ,逐渐增加水分 。脱蜡时间 清楚 。诸多的因素影响着 HE 染色切片的质量 ,其 宁长勿短 ,否则易造成染不上色或着色很淡 。水洗 中制片和染色的技术最关键 。 时间不宜过长 ,否则易脱片 。 1. 2 　用 10 %中性福尔马林及时充分固定 , 以防止 2 . 2 　染色 组织细胞自溶 、腐败 、膨胀 、收缩 ,保持组织和细胞正 2 . 2 . 1 　染色过程 。用过滤的苏木精将组织切片适 常的形态结构 ,便于染色后的鉴别和观察 。 当的过染色 ,淋巴结 、骨髓 、脾等细胞核密集的组织 , ( ) 1. 3 　用由低到高不同浓度的酒精 70 %～100 % 应缩短染色时间 ,经水洗后再用盐酸 、酒精分化 ,水 在不同的时间内把组织内的水分置换出来 ,否则组 洗至细胞核呈鲜明的蓝色 ,胞浆及背景无色之后 ,再 织变脆 、易碎 。 用伊红染胞浆 ,染成深浅不同程度的粉红色或红色 。 1. 4 　用二甲苯充分透明 ,便于透蜡包埋和光线的透 伊红染色时间 , 以苏木精对细胞核着色的程度为标 过 。 准 , 以求达到对比鲜明。如胞核过淡而胞浆过浓 ,造 1. 5 　用石蜡除去组织中的透明剂 ,增加其硬度 , 以 成以红盖蓝 ,影响观察 。 便切成薄片 。温度应控制在比石蜡的溶点高 2 度的 2 . 2 . 2 　分化 。分化过程是细胞核以外部分被着染 水平上 ,温度过高 、时间过长会导致组织收缩 、变硬 脱色 ,然后细胞核开始脱色 ,核的颜色达到适宜程度 变脆 ,不易切成完整的切片 。 后立即用自来水分化 、水洗 。如留有酸液 ,细胞核过 1. 6 　要用新蜡和旧蜡混合包埋 ,放在温箱内多次熔 淡不清晰 ,易使切片褪色 。分化液盐酸浓度不宜超 化 ,组织切面朝下放平整 。为了显示组织的各层结 过 1 % ,否则因分化能力过强 ,瞬间就可能将颜色脱 构 ,组织外周的石蜡要适当保留 , 以便连续切片 。