Exendin_4的表达及其降糖活性研究.pdfVIP

药 　物 　生 　物 　技 　术 3 16 Phar maceutical Biot echnolo gy 　2009 ,16 (4) :3 16～320 Exendin - 4 的表达及其降糖活性研究 1 2 2 1 祖向阳 , 张贵星 ,陈小让 ,王小纯 ( 1 河南农业大学生命科学学院 ,郑州 450002 ;2 郑州大学医学院 ,郑州 45000 1) ( ) 摘 　要 　根据 Gene Bank 中登录的 Exendin - 4 的氨基酸序列 AAB22006 ,结合大肠杆菌的密码子偏嗜 性 ,对原有基因 70 %的密码子进行改造 ,使其在大肠杆菌中高效表达 ; 同时添加 Kp n I 和 Nco I 酶切位点和肠激 酶识别位点 ,构建成重组表达载体 p E T - 32a ( + ) - Exendin - 4 ,转化大肠杆菌 BL 2 1 (D E3) 。在 30 ℃条件下 1 mmol/ L 的 IP T G 诱导表达 6 h ,融合蛋白表达量 占细菌蛋白总量的 32 % 。利用亲和层析纯化融合蛋白,每克 湿菌体可获得纯度 98 %的融合蛋白644 mg 。利用肠激酶切除融合蛋白的 N 端融合部分 ,用亲和层析吸附 N ( 端融合肽 ,每克湿菌体可获得纯度 99 %的 Exendin - 4 159 mg 。腹腔注射糖尿病基因小鼠 B KS. Cg - m + / + ) μ L ep r db/ J 鼠 ,血糖浓度下降极显著 ,最佳用量为 7 g/ kg ,注射后 4 h 血糖降低达 5193 % 。 关键词 　　Exendin - 4 ;基因改造 ;表达 ;血糖浓度 中图分类号 　Q78 文献标识码 :A 文章编号 :1005 - 89 15 (2009) 04 - 03 16 - 05 　　Exendin - 4 是从分布于美 国西南部与墨西 现工业化的大规模生产 、有效地降低生产成本 ,而 ( ) 哥北部地区的希拉毒蜥 Helo derma su sp ect um 且可以减少污染 。本研究旨在构建 Exen din - 4 的 唾液中分离到的多肽 , 由 39 个氨基酸组成 , 与 高效表达载体 、探索简便易行的纯化方法 、鉴定该 胰高血 糖 素 样 肽 - 1 ( GL P - 1) 相 似 性 高 达 方法制备的 Exendin - 4 的降糖活性 ,为基因工程 53 % ,并且生物学效应也几乎完全一致[ 1 ] , 它能 生产 Exendin - 4 奠定基础 。 增加胞 内 cA M P 浓度 , 刺激葡萄糖依赖 的胰 岛 1 　材料与方法 素分泌 , 即在血糖浓度高时刺激胰岛素分泌 ,低 浓度和正常浓度时不刺激胰岛素分泌[ 2 ]