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2009;29(6)%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%%南方医科大学学报(J%South%Med%Univ) · ·
shRNAmir慢病毒载体沉默鼻咽癌细胞中环氧合酶-2 的表达
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李 刚 李湘平 姜 立 鲁 娟 刘 雄 陈顺金 南方医科大学 南方医院耳鼻喉科 基因工程研究所 广
， ， ， ， ， ( ， ，
东广州510515)
摘要 目的 构建基于miR-155 结构的 shRNAmir 慢病毒表达载体 在鼻咽癌细胞中沉默 COX-2 基因的表达 探索全新
： ， ，
的COX-2 抑制方法 方法 转染小干扰 RNA (siRNA) 筛选出沉默 COX-2 表达的 RNA 干扰序列 以该序列替换
。 ， ，
miR-155 前体序列中的双链部分作为 anti-COX-2%shRNAmir 转录模板 构建pLVTHM/shRNAmir 慢病毒质粒表达载
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体 利用 293FT 细胞包装pLVTHM/anti-COX-2%shRNAmir 慢病毒 感染鼻咽癌 C666-1 细胞后 通过流式分选 建立
， 。 ， ，
anti-COX-2%shRNAmir 稳定表达 COX-2 基因沉默的亚系 结果 设计合成的 anti-COX-2a%siRNA 能够使COX-2%mRNA
， 。
表达下降 90% 以上 根据其序列构建的pLVTHM/shRNAmir 质粒载体测序无误 pLVTHM/anti-COX-2%shRNAmir 慢病
， ，
毒感染C666-1 细胞后 分选出亚系 C666-1 经反复传代仍可保持COX-2 基因沉默的表型 结论 pLVTHM/shRNAmir
， 。
慢病毒载体能够转录出基于 miR-155 结构的 shRNAmir 沉默鼻咽癌细胞 COX-2 的表达 为探索更加高效安全的
， ，
COX-
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